Научно-практический журнал Клиническая лабораторная диагностика

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОМПОНЕНТНОГО СОСТАВА БИОПЛЕНОК ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫХ БАКТЕРИЙ

ISSN: 0869-2084 (Print) ISSN: 2412-1320 (Online)

Посмотреть или загрузить статью

Скачать
Читать
Аннотация Об авторах Список литературы Ключ. слова

Аннотация

Существующие методы визуализации биопленки не предусматривают дифференцированной оценки её компонентного состава, поскольку отсутствует возможность установить субстрат, окрашиваемый генцианвиолетом, так как краситель может формировать комплексы, как с внутриклеточными, так и внеклеточными структурами. Такой подход не позволяет адекватно оценивать антибиоплёночные эффекты препаратов, в отличие от модификации существующего метода для определения соотношения клеточной части и матрикса биоплёнок грамположительных микроорганизмов. Оценку компонентного состава биоплёнок осуществляли с помощью двухэтапного подхода, когда сформированные биоплёнки грамположительных микроорганизмов окрашивали генцианвиолетом в течение 5 мин с последующей фиксацией красителя в бактериальных клетках раствором Люголя, затем растворяли окрашенные продукты 95% спиртом: компоненты матрикса - в течение 1 мин, совокупной биоплёнки - в течение 15 мин, после чего оценивали состав биоплёнок по формуле: М=(ОПбв/ОП15)×100, Кб=100-М, где М - доля матрикса, %; Кб - доля клеточной составляющей, %; ОПбв - оптическая плотность проб, когда спирт для растворения окрашенного продукта выдерживают не более 1 мин; ОП15 - оптическая плотность проб, когда спирт для растворения окрашенного продукта выдерживают 15 мин. Показано, что в составе биоплёнки, сформированной коллекционным штаммом, доля матрикса составляет 13,2%, на клеточный компонент приходится 86,8%. При культивировании того же штамма в присутствии антибиотика наблюдается увеличение матрикса биоплёнки, что вероятно обусловлено компенсаторным ответом микроорганизма на действие антибиотика. Предлагаемый подход к изучению биоплёнок позволяет оценить её компонентный состав. Получение таким способом дополнительной информации может обеспечить повышение эффективности антимикробной терапии при сокращении времени исследования.