ИСПОЛЬЗОВАНИЕ НАБОРА «BCR/ABL — МУЛЬТИТЕСТ» В АЛГОРИТМЕ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ ОНКОГЕМАТОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ: ЭКОНОМИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ

Аннотация

Аномальные мРНК гибридного гена BCR/ABL в подавляющем числе случаев в зависимости от точки слияния генов инициируют синтез протеинов с массой 210 кДа (p210), 190 кДа (p190) и 230 кДа (p230). Экспрессия варианта р210 наиболее часто встречается при ХМЛ (95% случаев), в то время как варианты р190 и р230 при этом заболевании встречаются гораздо реже (1-4%). Напротив, при ОЛЛ преобладает транскрипт р190 — до 80% всех BCR/ABL позитивных ОЛЛ. Определение экспрессии гена BCR/ABL регламентируется клиническими рекомендациями по диагностике ХМЛ и ОЛЛ как последовательные тесты в соответствии с частотой их встречаемости. Вместе с тем, в условиях первичного тестирования пациентов с подозрением на онкогематологические заболевания при низкой распространенности в когорте обследуемых лиц BCR/ABL позитивных пациентов последовательное тестирование сопряжено с низкой экономической эффективностью. Цель: апробация параллельного алгоритма одновременного выявления основных вариантов химерных транскриптов BCR/ABL (р210, р190 и р230) с использованием мультиплексного формата ОТ-ПЦР, реализованного в наборе «BCR/ABL-МУЛЬТИТЕСТ». В работе использовались обезличенные пробы крови пациентов, направленных в лабораторию с подозрением на наличие ХМЛ, а также пробы пациентов с ОЛЛ. Тестирование проб крови проводили с использованием двух вариантов алгоритма: последовательного определения отдельных транскриптов BCR/ABL и параллельного выявления всех трех вариантов транскриптов с помощью разработанного набора «BCR/ABL-МУЛЬТИТЕСТ». Для детекции транскрипта р210, использовали коммерческий набор «АмплиСенс® Лейкоз Квант M-bcr-FRT» (ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия). Одновременно применяли тест выявления всех трех вариантов транскриптов BCR/ABL с использованием набора реактивов «BCR/ABL-МУЛЬТИТЕСТ», основанного на монохромной мультиплексной реакции «в одной пробирке». Обратную транскрипцию осуществляли с использованием набора реагентов «РЕВЕРТА-L» (ФБУН ЦНИИ эпидемиологии Роспотребнадзора, Россия) в соответствии с инструкцией производителя. Показано, что при использовании наборов «BCR/ABL-МУЛЬТИТЕСТ» и «АмплиСенс® Лейкоз Квант M-bcr-FRT» наблюдается высокий уровень корреляции количественных результатов определения химерного транскрипта BCR/ABL р210 (r = 0,99). При использовании предлагаемого параллельного алгоритма с первичным использованием набора «BCR/ABL-МУЛЬТИТЕСТ» из 95 пациентов с подозрением ХМЛ было выявлено 9 проб с транскриптом р210, один с р190 BCR/ABL и также в одном случае был обнаружен вариант транскрипта, характерный для хронического нейтрофильного лейкоза — р230 BCR/ABL. Расчетная стоимость выявления одного позитивного случая BCR/ABL при использовании параллельного алгоритма диагностики с набором «BCR/ABL-МУЛЬТИТЕСТ» при сложившимся потоке исследований сокращается примерно в 2 раза за счет уменьшения количества используемого лабораторного пластика и объема реакционной смеси, а также отсутствия необходимости повторных отдельных тестов для выявления р190 и р230. Использование мультиплексной тест-системы ПЦР-РВ «BCR/ABL-МУЛЬТИТЕСТ», позволяет выявлять «в одной пробирке» все три основных варианта транскриптов BCR/ABL — р210, р190, р230 и достигать существенной экономии ресурсов при обследовании когорты пациентов с подозрением на ХМЛ и ОЛЛ и низкой встречаемостью позитивных образцов

Об авторах

Список литературы

Kang Z.J., Liu Y.F., Xu L.Z., Long Z.J., Huang D., Yang Y. et. al. The Philadelphia chromosome in leukemogenesis. Chin. J. Cancer. 2016;35:48. https://doi.org/10.1186/s40880-016-0108-0

Савченко В.Г., Паровичникова Е.Н., Афанасьев Б.В., Троицкая В.В., Гаврилина О.А., Соколов А.Н. и др. Клинические рекомендации по диагностике и лечению острых лимфобластных лейкозов взрослых. (редакция 2018) [электронный документ]. Доступно по: https://npngo.ru/uploads/media_document/293/556718e9-0ff5-46f3-bff8-bd592c83bpdf Ссылка активна на 30.03.2021.

Туркина А.Г., Зарицкий А.Ю., Шуваев В.А., Челышева Е.Ю., Ломаиа Е.Г. и др. Клинические рекомендации по диагностике и лечению хронического миелолейкоза. Клиническая онкогематология. 2017;10(3): 294-316. https://doi.org/10.21320/2500-2139-2017-10-3-294-316

Deininger M.W., Goldman J.M., Melo J.V. The molecular biology of chronic myeloid leukemia. Blood. 2000;96(10):3343-56.

Gutiérrez M.I., Timson G., Siraj A.K., Bu R., Barbhaya S., Banavali S. et al. Single monochrome real-time RT-PCR assay for identification, quantification, and breakpoint cluster region determination of t(9;22) transcripts. J. Mol. Diagn. 2005;7(1):40-7. https://doi.org/10.1016/S1525-1578(10)60007-4

Меликян А.Л., Ковригина А.М., Суборцева И.Н., Шуваев В.А., Морозова Е.В., Ломаиа Е.Г. и др. Клинические рекомендации по диагностике и терапии Ph-негативных миелопролиферативных заболеваний (истинная полицитемия, эссенциальная тромбоцитемия, первичный миелофиброз) (редакция 2020 г.). Клиническая онкогематология. 2021;14(2): 262-98

Tsuchiya K., Tabe Y., Ai T., Ohkawa T., Usui K., Yuri M. et al. Eprobe mediated RT-qPCR for the detection of leukemia-associated fusion genes. PLoS One. 2018;13(10):e0202429. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0202429

Jinawath N., Norris-Kirby A., Smith B.D., Gocke C.D., Batista D.A., Griffin C.A. et al. A rare e14a3 (b3a3) BCR-ABL fusion transcript in chronic myeloid leukemia: diagnostic challenges in clinical laboratory practice. J. Mol. Diagn. 2009;11(4):359-63. https://doi.org/10.2353/jmoldx.2009.090008

Luthra R., Sanchez-Vega B., Medeiros L.J. TaqMan RT-PCR assay coupled with capillary electrophoresis for quantification and identification of BCR-ABL transcript type. Mod. Pathol. 2004;17(1):96-103. https://doi.org/10.1038/modpathol.3800026

Никулина О.В., Цаур Г.А., Ригер Т.О., Яковлева Ю.А., Демина А.С., Семенихина Е.Р. и др. Тактика выявления частых и редких типов химерного транскрипта BCR-ABL при хроническом миелоидном лейкозе. Клиническая онкогематология. 2015;8(2):161-8.

Tong Y.Q., Zhao Z.J., Liu B., Bao A.Y., Zheng H.Y., Gu J. et al. New rapid method to detect BCR-ABL fusion genes with multiplex RT-qPCR in one-tube at a time. Leuk. Res. 2018;69:47-53. https://doi.org/10.1016/j.leukres.2018.04.001

Saussele S., Weisser A., Müller M.C., Emgi M., La Rosée P., Paschka P. et al. Frequent polymorphism in BCR exon b2 identified in BCR-ABL positive and negative individuals using fluorescent hybridization probes. Leukemia. 2000;14(11):2006-10. https://doi.org/10.1038/sj.leu.2401929

Ключевые слова