Аннотация
Актуальность. В настоящее время отсутствуют данные, которые бы однозначно регламентировали условия хранения образцов слюны после сбора и до проведения анализа. Цель работы – изучить стабильность аналитов слюны при разных условиях хранения образцов (температура и длительность хранения).
Материал и методы. Проведено исследование биохимических параметров слюны 20 женщин (возраст 29,1±12,3 года) по следующим показателям: содержание белка, мочевины, альбумина, мочевой кислоты, суммарное содержание α-аминокислот, имидазольных соединений, продуктов липопероксидации и оксида азота, а также активность лактатдегидрогеназы, гамма-глутамилтрансферазы, щелочной фосфатазы и каталазы. Одну часть пробы анализировали непосредственно после сбора без хранения и замораживания, в остальных повторяли выполнение первоначального перечня анализов после хранения при температуре -20 °С и -80 °С в течение 3 и 6 месяцев соответственно.
Результаты. При хранении отмечена общая тенденция к снижению активности ферментов, а в ряде случаев и полного их разрушения, в частности лактатдегидрогеназы. Показатели белкового обмена сохраняют свою стабильность при заморозке и мало зависят от длительности хранения. Наблюдается снижение содержания продуктов перекисного окисления липидов.
Заключение. Температура и время хранения могут влиять на стабильность состава слюны, что необходимо учитывать при планировании эксперимента.
Annotation
Background. Currently, there are no data that clearly regulate the storage conditions of saliva samples after collection and before analysis. The aim of this study was to investigate the stability of saliva analytes under different sample storage conditions (temperature and storage duration).
Material and methods. A study of the biochemical parameters of saliva from 20 women (aged 29.1 ± 12.3 years) was conducted for the following indicators: protein, urea, albumin, uric acid, total α-amino acid content, imidazole compounds, lipid peroxidation products, and nitric oxide, as well as the activity of lactate dehydrogenase, gamma-glutamyl transferase, alkaline phosphatase, and catalase. One portion of the sample was analyzed immediately after collection without storage or freezing; the remaining portions underwent repeated analysis after storage at -20 °C and -80 °C for 3 and 6 months, respectively.
Results. During storage, a general trend toward decreased enzyme activity has been observed, and in some cases, complete destruction of enzymes, particularly lactate dehydrogenase. Protein metabolism parameters remain stable during freezing and are little affected by storage time. A decrease in the content of lipid peroxidation products has been observed.
Conclusion. Storage temperature and time can affect the stability of saliva composition, which must be taken into account when planning the experiment.
Key wоrds: saliva; storage; freezing; biochemistry; enzymes
Список литературы
ЛИТЕРАТУРА (пп. 1-4, 7-14, 16, 17, 19-22, 24-31, 33-36 см. REFERENCES)
5. Борисова О.В., Маковецкая Г.А., Гильмиярова Ф.Н., Селезнева И.А., Мазур Л.И., Жирнов В.А., Решетова С.Н. Современный взгляд на клиническую ценность исследования ротовой жидкости в практике врача-педиатра. Медицинский Совет. 2022; 19: 138-45. DOI: 10.21518/2079-701X-2022-16-19-139-145.
6. Раимкулова Ч.А., Аронбаев С.Д., Аронбаев Д.М. Саливодиагностика: прошлое, настоящее, будущее. Universum: химия и биология. Электронный научный журнал. 2023; 1-2: 103. DOI: 10.32743/UniChem.2023.103.1.1484.
15. Савинов С.С., Анисимов А.А. Влияние условий отбора образцов слюны человека на результаты определения макро- и микроэлементов. Журнал аналитической химии. 2020; 75(4): 327-32. DOI: 10.31857/S0044450220040143.
18. Проходная В.А., Чибичян Е.Х., Ломова А.С., Косых А.Ю. Методические подходы к сбору и исследованию биологических жидкостей ротовой полости в рамках преподавания пропедевтики стоматологических болезней. Главврач Юга России. 2018; 1 (59): 43-6. https://elibrary.ru/item.asp?id=32322152.
23. Сарф Е.А., Бельская Л.В. Факторы вариабельности состава смешанной слюны (обзор литературы). Биомедицинская химия. 2025; 71 (5): 319-32. DOI: 10.18097/PBMCR1574.
32. Епринцев А.Т., Комарова Н.Р., Фалалеева М.И. Физико-химические и регуляторные свойства лактатдегидрогеназы из листьев гороха (Pisum sativum L.) в условиях дефицита кислорода. Прикладная биохимия и микробиология. 2019; 55(2): 166-71. DOI: 10.1134/S0555109919020077.
REFERENCES
Zhou Y., Liu Z. Saliva biomarkers in oral disease. Clin. Chim. Acta. 2023; 1(548): 117503. DOI: 10.1016/j.cca.2023.117503.
Melguizo-Rodríguez L., Costela-Ruiz V.J., Manzano-Moreno F.J., Ruiz C., Illescas-Montes R. Salivary biomarkers and their application in the diagnosis and monitoring of the most common oral pathologies. Int. J. Mol. Sci. 2020; 21: 1-17. DOI: 10.3390/ijms21145173.
Mortazavi H., Yousefi-Koma A.A., Yousefi-Koma H. Extensive comparison of salivary collection, transportation, preparation, and storage methods: a systematic review. BMC Oral. Health. 2024; 24(1): 168. DOI: 10.1186/s12903-024-03902-w.
Dongiovanni P., Meroni M., Casati S., Goldoni R., Thomaz D.V., Kehr N.S., Galimberti D., Del Fabbro M., Tartaglia G.M. Salivary biomarkers: novel noninvasive tools to diagnose chronic inflammation. Int. J. Oral. Sci. 2023; 15(1): 27. DOI: 10.1038/s41368-023-00231-6.
Borisova O.V., Makovetskaya G.A., Gil`miyarova F.N., Selezneva I.A., Mazur L.I., Zhirnov V.A., Reshetova S.N. A modern view on the clinical value of the study of oral fluid in the practice of a pediatrician. Meditsinskiy Sovet. 2022; 16(19): 139-45. DOI: 10.21518/2079-701X-2022-16-19-139-145. (in Russian)
Raimkulova Ch.A., Aronbaev S.D., Aronbaev D.M. Salivodiagnostics: past, present, future. Universum: khimiya i biologiya : elektronnyi nauchnyi zhurnal. 2022; 1-2: 103. DOI: 10.32743/UniChem.2023.103.1.1484. (in Russian)
Buchan E., Kelleher L., Clancy M., Stanley Rickard, J.J., Oppenheimer P.G. Spectroscopic molecular-fingerprint profiling of saliva. Anal. Chim. Acta. 2021; 15(1185): 339074. DOI: 10.1016/j.aca.2021.339074.
Prasad S., Tyagi A.K., Aggarwal B.B. Detection of inflammatory biomarkers in saliva and urine: potential in diagnosis, prevention, and treatment for chronic diseases. Exp. Biol. Med. 2016; 241: 783-99. DOI: 10.1177/1535370216638770.
Tóthová L., Kamodyová N., Červenka T, Celec P. Salivary markers of oxidative stress in oral diseases. Front. Cell Infect. Microbiol. 2015; 20(5): 73. DOI: 10.3389/fcimb.2015.00073.
Karjalainen S., Sewón L., Söderling E., Larsson B., Johansson I., Simell O., Lapinleimu H., Seppänen R. Salivary cholesterol of healthy adults in relation to serum cholesterol concentration and oral health. J. Dent. Res. 1997; 76(10): 1637-43. DOI: 10.1177/00220345970760100401.
Amado F., Calheiros-Lobo M.J, Ferreira R., Vitorino R. Sample treatment for saliva proteomics. Adv. Exp. Med. Biol. 2019; 1073:23-56. DOI: 10.1007/978-3-030-12298-0_2.
Slavish D.C., Szabo Y.Z. The effect of acute stress on salivary markers of inflammation: a systematic review protocol. Syst. Rev. 2019; 8(1): 1-8. DOI: 10.1186/s13643-019-1026-4.
Szabo Y.Z, Fernandez-Botran R., Newton T.L. Cumulative trauma, emotion reactivity and salivary cytokine levels following acute stress in healthy women. Anxiety Stress Coping. 2019; 32(1): 82-94. DOI: 10.1080/10615806.2018.1524377.
Vincent F.B., Nim H.T., Lee J.P.W., Morand E.F., Harris J. Effect of storage duration on cytokine stability in human serum and plasma. Cytokine. 2019; 113: 453-7. DOI: 10.1016/j.cyto.2018.06.009.
Savinov S. S., Anisimov A. A. Influence of human saliva sampling conditions on the results of macro- and microelement determination. Zhurnal analiticheskoy khimii. 2020; 75(4): 327-32. DOI: 10.31857/S0044450220040143. (in Russian)
Aydin S., Ozercan H. I., Aydın S., Ozkan Y., Dagli F., Oguzoncul F., Geckil H. Biological rhythm of saliva ghrelin in humans. Biological Rhythm. Research. 2006; 37(2): 169-77. DOI: 10.1080/09291010600576860.
Ekström J., Khosravani N., Castagnola M., Messana I. Saliva and the control of its secretion. Dysphag: Diagnos. Treat. 2019; 21-57. DOI: 10.1007/174_2017_143.
Prokhodnaya V.A., Chibichyan E.H., Lomova A.S., Kosykh A.Y. Methodological approaches of collection and research of biological liquids of the mouth cavity within the framework of teaching disorders of dentistry diseases. Glavvrach Yuga Rossii. 2018; 1(59): 43-6. https://elibrary.ru/item.asp?id=32322152. (in Russian)
Jasim H., Carlsson A., Hedenberg-Magnusson B., Ghafouri B., Ernberg M. Saliva as a medium to detect and measure biomarkers related to pain. Sci. Rep. 2018; 8(1): 3220. DOI: 10.1038/s41598-018-21131-4.
Ishikawa S., Sugimoto M., Kitabatake K., Tu M., Sugano A., Yamamori I., Iba A., Yusa K., Kaneko M., Ota S., Hiwatari K., Enomoto A., Masaru T., Iino M. Effect of timing of collection of salivary metabolomic biomarkers on oral cancer detection. Amino Acids. 2017; 49(4): 761-70. DOI: 10.1007/s00726-017-2378-5.
Cohier C., Mégarbane B., Roussel O. Illicit drugs in oral fluid: Evaluation of two collection devices. J. Analytical Toxicol. 2017; 41(1): 71-6. DOI: 10.1093/jat/bkw100.
Bel’skaya L.V., Kosenok V.K., Sarf E.A. Chronophysiological features of the normal mineral composition of human saliva. Archives of Oral Biology. 2017; 82: 286-92. DOI: 10.1016/j.archoralbio.2017.06.024.
Sarf E.A., Bel’skaya L.V. Factors of variability in the composition of mixed saliva (a review). Biomeditsinskaya Khimiya. 2025; 71(5): 319-32. DOI: 10.18097/PBMCR1574. (in Russian)
Radovani B., Lauc G., Gudelj I. Storage stability and HILIC-UHPLC-FLR analysis of immunoglobulin G N-glycome from saliva. Anal. Bioanal. Chem. 2023; 415(28): 6985-93. DOI: 10.1007/s00216-023-04682-y.
Barranco T., Rubio C.P., Tvarijonaviciute A., Rubio M., Damia E., Lamy E. et al. Changes of salivary biomarkers under different storage conditions: effects of temperature and length of storage. Biochem. Med. (Zagreb). 2019; 29. DOI: 10.11613/BM.2019.010706.
Dos Santos D.R., Souza R.O., Dias L.B., Ribas T.B., de Oliveira L.C.F., Sumida D.H., Dornelles R.C.M., Nakamune A.C.M.S., Chaves-Neto A.H. The effects of storage time and temperature on the stability of salivary phosphatases, transaminases and dehydrogenase. Arch. Oral. Biol. 2018; 85: 160-5. DOI: 10.1016/j.archoralbio.2017.10.016.
Amadeu J.K., Lemes A.L., Schussel J.L., Amenábar J.M. Effect of storage time and temperature on salivary total antioxidant capacity, total oxidant status, and oxidant stress index. Acta Stomatol. Croat. 2019; 53(2): 119-24. DOI: 10.15644/asc53/2/3.
Janovičová Ľ., Holániová D., Vlková B., Celec P. Pre-analytical factors affecting extracellular DNA in saliva. Diagnostics (Basel). 2024; 14(3): 249. DOI: 10.3390/diagnostics14030249.
Furuhashi H., Takayasu L., Isshi K., Hara Y., Ono S., Kato M., Sumiyama K., Suda W. Effect of storage temperature and flash-freezing on salivary microbiota profiles based on 16S rRNA-targeted sequencing. Eur. J. Oral. Sci. 2022; 130(2): e12852. DOI: 10.1111/eos.12852.
Kim H.J., Park D.H., Han S.H., Kim S.Y. Optimal storage time and temperature of human oral samples to minimize microbiome changes: A scoping review. Jpn. Dent. Sci. Rev. 2024; 60: 220-31. DOI: 10.1016/j.jdsr.2024.05.001.
Alegre E., Varo N., Fernández-Calle P., Calleja S., González Á. Impact of ultra-low temperature long-term storage on the preanalytical variability of twenty-one common biochemical analytes. Clin. Chem. Lab. Med. 2022; 60(7): 1003-10. DOI: 10.1515/cclm-2022-0063.
Eprintseva A.T., Komarova N.R., Falaleeva M.I. Physicochemical and regulatory properties of Lactatdehydrogenase from pea leaves (Pisum sativum L.) in the conditions of oxygen deficiency. Prikladnaya biokhimiya i mikrobiologiya. 2019; 55(2): 166-71. DOI: 10.1134/S0555109919020077. (in Russian)
Cheng N., Johnson L., Dufresne J., Mazinani S., Marshall J.G. Alkaline phosphatase-streptavidin conjugate (APSA) enzyme and binding activity over time and storage conditions. Biochem. Biophys. Rep. 2025; 43: 102160. DOI: 10.1016/j.bbrep.2025.102160.
Nam M., Jo S.R., Park J.H., Kim M.S. Evaluation of critical factors in the preparation of saliva sample from healthy subjects for metabolomics. J. Pharm. Biomed. Anal. 2023; 223: 115145. DOI: 10.1016/j.jpba.2022.115145.
Tsikas D. GC-MS and GC-MS/MS measurement of malondialdehyde (MDA) in clinical studies: Pre-analytical and clinical considerations. J. Mass Spectrom Adv. Clin. Lab. 2023; 30: 10-24. DOI: 10.1016/j.jmsacl.2023.08.001.
Yang Z., Du C., Chang Z., Yang Y., Hu L. Role of oral and gut microbiomes in enterosalivary nitrate metabolism and their effects on systemic disease. Front. Cell Infect. Microbiol. 2025; 15: 1612223. DOI: 10.3389/fcimb.2025.1612223.