Аннотация
Тест ДНК комет является общепринятым для изучения генотоксичности новых лекарственных веществ на доклинической стадии. Целью работы явилось изучение перспектив применения этого метода в клинической лабораторной диагностике. Были изучены аналитические характеристики теста и проведено пилотное исследование на здоровых добровольцах и больных, находящихся в отделении интенсивной терапии. Материалом для исследования являлась цельная кровь. Аналитическая вариация содержания ДНК в «хвостах комет» находилась в пределах 5–8 %. Смещение (bias), которое определяли определяли методом Монте-Карло, составило 2,2 %. Общая аналитическая погрешность метода (TE) составила 15,6 %. Прогнозируемые групповая и индивидуальная вариабельности оцениваются величинами 5 % и 12 %. Референсный интервал содержания ДНК в «хвостах комет» для условно здоровых добровольцев (n = 25) составляет 2,28 — 2,72 %, а значения показателя у всех больных превышали эти значения. Таким образом, можно сделать вывод о приемлемости основных аналитических показателей, а также о перспективности дальнейших исследований по внедрению теста ДНК-комет в рутинную лабораторную практику.
Annotation
The comet DNA test is generally accepted for studying the genotoxicity of new drugs at the preclinical stage. The aim of the work was to study the prospects of application of this method in clinical laboratory diagnostics. Analytical characteristics of the test were studied and a pilot study was conducted on healthy volunteers and patients in the intensive care unit. The material for the study was whole blood. The analytical variation of DNA content in “comet tails” was in the range of 5-8%. The bias, which was determined by Monte Carlo method, was 2.2%. The total analytical error (TE) of the method was 15.6%. The predicted group and individual variability were estimated to be 5% and 12%. The reference interval of DNA content in “comet tails” for conditionally healthy volunteers (n=25) is 2.28 — 2.72%, and the values of the index in all patients exceeded these values. We can conclude about the acceptability of the main analytical indicators, as well as the prospect of further studies on the introduction of the DNA-comet test into routine laboratory practice.
Key words: DNA; genotoxicity; DNA comet assay; variability; convergence; reproducibility; reference interval; validation
Список литературы
ЛИТЕРАТУРА (пп. 1-4, 6, 8, 11, 13 см. REFERENCES)
5. Верле О.В., Сиреканян А.Г., Елисеева Н.В., Лифанова Ю.В., Спасов А.А., Островский О.В. Влияние нового каппа-агониста (фторфенил производное имидазо[1,2-а] бензимидазола) на геном крыс. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. Регуляторные исследования и экспертиза лекарственных средств. 2023; 13 (1): 42-50. DOI: 10.30895/1991-2919-2023-13-1-42-50.
7. Жанатаев А.К., Дурнев А.Д., Оганесянц Л.А. Метод гель-электрофореза изолированных клеток (метод «ДНК-комет») в пищевой генотоксикологии. Хранение и переработка сельхозсырья. 2007; 1: 31-3.
9. Методические рекомендации «Оценка генотоксических свойств методом ДНК-комет in vitro» от 14.10.2010 г. МР 4.2.0014-10. Роспотребнадзор. М.: Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора; 2011.
10. Гуськова Н.К., Горошинская И.А., Сурикова Е.И., Тарнопольская О.В., Меньшенина А.П., Немашкалова Л.А. и др. Повреждение ДНК и показатели окислительного статуса в крови больных раком шейки матки с наличием и отсутствием хламидийной инфекции. Современные проблемы науки и образования. 2016; 5: 29.
12. Михайлов А.О., Попов А.Ф., Иванова Н.С., Симакова А.И. Повреждения ДНК лимфоцитов при хронических вирусных гепатитах В, С. Журнал инфектологии. 2017; 9(2): 29-36. DOI: 10.22625/2072-6732-2017-9-2-29-36.
14. Методические рекомендации «Организация преаналитического этапа при централизации лабораторных исследований» от 30.05.2013. Минздрав РФ. М.; 2013.
REFERENCES
Buchynska L., Brieieva O., Glushchenko N., Vorobyova L., Bilyk O. DNA repair deficiency in peripheral blood lymphocytes of endometrial cancer patients with a family history of cancer. BMC Cancer. 2014; 14: 765. DOI: 10.1186/1471-2407-14-765.
Chumduri C., Gurumurthy R.K., Zadora P.K., Mi Ya., Meyer T.F. Chlamydia infection promotes host DNA damage and proliferation but impairs the DNA damage response. Cell Host & Microbe. 2013; 13(6): 746-58. DOI: 10.1016/j.chom.2013.05.010.
Cukurova Z., Cetingok H., Ozturk S., Gedikbasi A., Hergunsel O., Ozturk D. et al. DNA damage effects of inhalation anesthetics in human bronchoalveolar cells. Medicine. 2019; 98(32): 1-7. DOI: 10.1097/MD.0000000000016518.
Gerić M., Gajski G., Oreščanin V., Garaj-Vrhovac V. Seasonal variations as predictive factors of the comet assay parameters: a retrospective study. Mutagenesis. 2018; 33(10): 33-8. DOI: 10.1093/mutage/gex023.
Verle O.V., Sirekanyan A.G., Eliseeva N.V., Lifanova Yu.V., Spasov A.A., Ostrovskiy O.V. Effects of a new kappa agonist (fluorophenyl derivative of imidazo[1,2-a] benzimidazole) on the rat genome. Vedomosti Nauchnogo tsentra ekspertizy sredstv meditsinskogo primeneniya. Regulyatornye issledovaniya i ekspertiza lekarstvennykh sredstv. 2023; 13 (1): 42-50. DOI: 10.30895/1991-2919-2023-13-1-42-50. (in Russian)
Hartmann A., Agurell E., Beevers C., Brendler-Schwaab S., Burlinson B., Clay P. et al. Recommendations for conducting the in vivo alkaline comet assay. Mutagenesis. 2003; 18(1): 45-51. DOI: 10.1093/mutage/18.1.45.
Zhanataev A.K., Durnev A.D., Oganesyants L.A. Gel-electrophoresis method of the isolated cells («DNA-comet» method) in food gene toxicology. Khranenie i pererabotka sel’khozsyr’ya. 2007; 1: 31-3. (in Russian)
Chandirasekar R., Lakshman Kumar B., Sasikala K., Jayakumar R., Suresh K., Venkatesan R. et. al. Assessment of genotoxic and molecular mechanisms of cancer risk in smoking and smokeless tobacco users. Mutat. Res. Genet. Toxicol. Environ. Mutagen. 2014; 767: 21-7. DOI: 10.1016/j.mrgentox.2014.04.007.
Methodological recommendations «Evaluation of genotoxic properties by DNA-comet method in-vitro» dated 14.10.2010. MR 4.2.0014-10. Rospotrebnadzor. Moscow: Federalnyi tsentr gigieny i epidemiologii Rospotrebnadzora; 2011. (in Russian)
Gus`kova N.K., Goroshinskaya I.A., Surikova E.I., Tarnopolskaya O.V., Men`shenina A.P., Nemashkalova L.A. et al. DNA damage and indicators of oxidative status in blood of patients with cervical cancer with and without chlamydial infection. Sovremennye problemy nauki i obrazovaniya. 2016; 5: 29. (in Russian)
Ben-Shlomo An., Deng N., Ding E. DNA damage and growth hormone hypersecretion in pituitary somatotroph adenomas. The Journal of Clinical Investigation. 2020; 130(11): 5738-55. DOI: 10.1172/JCI138540.
Mikhaylov A.O., Popov A.F., Ivanova N.S., Simakova A.I. DNA damage in lymphocytes in chronic viral hepatitis B, C. Zhurnal infektologii. 2017; 9(2): 29-36. DOI: 10.22625/2072-6732-2017-9-2-29-36. (in Russian)
Tola E.N., Koşar P.A., Karatopuk D.A., Sancer O., Oral B. Effect of DNA damage of cumulus oophorus cells and lymphocytes analyzed by alkaline comet assay on oocyte quality and intracytoplasmic sperm injection success among patients with polycystic ovary syndrome. J. Obstet.Gynaecol. Res. 2019; 45(3): 609-18. DOI: 10.1111/jog.13868.
Methodological recommendations «Organization of the pre-analytical stage in the centralization of laboratory tests» dated 30.05.2013. Minzdrav RF. Moscow; 2013. (in Russian)