Аннотация
Проведено сравнение методов подготовки проб жидких и твёрдых биологических материалов для последующего газохроматографического определения содержания жирных кислот. Классический метод (с предварительной экстракцией липидов из биологической матрицы методами Фолча или Хара-Рэдина) не обеспечивает каких-либо ощутимых преимуществ в сравнении с безэкстракционным методом, т. е. прямой дериватизацией высушенной биологической пробы в ходе её последовательной обработки растворами метоксида натрия и трёхфтористого бора в метаноле. Последний универсальный метод гарантирует не меньшую, а достоверно большую степень извлечения определяемых веществ, принципиально упрощает и ускоряет процедуру подготовки проб. Вариант метода сухой капли (на пористых дисках из целлюлозной или, предпочтительно, фторопластовой фильтрующей бумаги) оказывается удобным и для лабораторного анализа жидких биологических проб, позволяя исключить не только операцию их жидко-жидкостной экстракции, но и стадию вакуумной сушки. В отличие от методов Фолча и Хара — Рэдина, безэкстракционный метод не требует обязательной «гомогенизации» биологического материала, т. е. его измельчения до частиц микронного размера. Применение безэкстракционной дериватизации — даже при работе с крупными частицами биологического материала размером 0,2-1,0 мм — обеспечивает заметно большую степень извлечения определяемых веществ (по сравнению с таковой при экстракции микронных гомогенизатов в различных вариантах классического метода Фолча).
Об авторах
Ариповский Александр ВикторовичФБУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Госсанэпиднадзора РФ г. Оболенск, Московская область канд. хим. наук., вед. науч. сотр. ФГУН «Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии» Россанэпиднадзора РФ, 142279 aripovsky@rambler.ru
Список литературы
Harris W.S., von Schacky C. The Omega-3 Index: a New Risk Factor from Coronary Heart Disease. Prev. Med. 2004; 39(1): 212.
Young G., Conquer J. Omega-3 fatty acids and neuropsychiatric disorders. Reprod. Nutr. Dev. 2005; 45(1): 1.
Kabagambe E.K., Ezeamama A.E., Guwatudde D., Campos H., Fawzi W.W. Plasma n-6 fatty acid levels are associated with CD4 cell counts, hospitalization, and mortality in HIV-infected patients. J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 2016; 73(5): 598.
Cristie W.W. Preparation of ester derivatives of fatty acids for chromatographic analysis. Advances in Lipid Methology -Two. Dundee: Ed. W.W.Cristie, Oily Press, 1993. P. 69. https://lipidlibrary.aocs.org/Analysis/content.cfm?ItemNumber=40374 (16.10.2017г)
AOCS Lipid Library. Literary Survey. Combined Extraction-Esterification of Fatty Acids. https://lipidlibrary.aocs.org/Analysis/content.cfm?ItemNumber=39377 (16.10.2017г.)
Folch J., Lees M., Stanley G.H.S. A Simple method for isolation and purification of total lipids from animal tissues. J. Biol. Chem. 1957; 226(1): 497.
Reis A., Rudnitskaya A., Blackburn G.J., Fauzi N.M., Pitt A.R., Spickett C.M. A Comparison of five lipid extraction systems for lipidomic studies of human LDL. J. Lipid Res. 2013; 54(7): 1812.
CYBERLIPID CENTER. Lipid Extraction General Methodologies. www.cyberlipid.org/extract/extr0002.htm# (16.10.2017г.)
Hara A., Radin N.S. Lipid extraction of tissues with low-toxicity solvent. Anal. Biochem. 1978; 90(1): 420.
Lepage G., Roy C.C. Improved recovery of fatty acids through direct transesterification without prior extraction or purification. J. Lipid Res. 1984; 25(12): 1392.
Glaser C., Demmelmair H., Koletzko B. High-throughput analysis of total plasma fatty acid composition with direct in situ transesterification. PLoS. 2010; 5(8): e12045.
Griffiths M.J., van Hille R.P., Harrison S.T. Selection of direct transesterification as the preferred method for essay of fatty acid content of microalgae. Lipids. 2010; 45(11): 1053.
Sattler W., Puhl H., Hayn N. Determination of fatty acids in the main lipoprotein classes by capillary GC: BF3/methanol transesterification of lyophilized samples Instead of Folch extraction gives higher yields. Anal. Biochem. 1991; 198(1): 181.
Lakshmy R., Gupta R., Prabhakaran D., Snehi U., Reddy K.S. Utility of dried blood spots for measurement of cholesterol and triglycerides in a surveillance study. J. Diabetes Sci. Technol. 2010; 4(2): 258.
Ариповский А.В., Колесник О.П., Веждел М.И., Титов В.Н. Метод подготовки проб для хроматографического определения жирных кислот без предварительной экстракции липидов. Клиническая лабораторная диагностика. 2012; 1: 3 — 6.
Ариповский А.В., Астахова Е.А., Колесник П.О., Кулагина Т.П., Шушман И.В., Титов В.Н. Перспективный фторопластовый пористый носитель для консервирования и пересылки проб плазмы крови: применение «метода сухой капли» с целью последующего определения индивидуальных жирных кислот. Клиническая лабораторная диагностика. 2017; 62(9): 517 — 26.