АПРОБАЦИЯ И ДОКЛИНИЧЕСКИЕ ИСПЫТАНИЯ ОТЕЧЕСТВЕННОГО НАБОРА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВИДОВОЙ ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ВИРУСОВ ГЕРПЕСА ЧЕЛОВЕКА 6А И 6В

Аннотация

Вирус герпеса человека 6 (ВГЧ-6) с 2012 года подразделяют на два биологических вида – ВГЧ-6А и ВГЧ-6В. Данные о циркуляции этих видов в России ограничены. Целью нашей работы была апробация и доклинические испытания отечественного набора реагентов для выявления и видовой дифференциации вирусов герпеса человека 6А и 6В методом ПЦР (ГК «Алкор Био», г. Санкт-Петербург). Изучены образцы биологического материала 239 детей и взрослых с острой и латентной ВГЧ-6А/В-инфекцией и подозрением на хромосомно-интегрированный ВГЧ-6А/В-статус. Для подтверждения результатов дифференциации использовали параллельное тестирование образцов с помощью двух альтернативных
методик и секвенирование. Дополнительно проведена апробация на панели контрольных образцов ДНК ВГЧ-6А/В. Видовая дифференциация ВГЧ-6А и ВГЧ-6В происходит независимо от исходных концентраций ДНК вирусов в исследуемом образце. Аналитическая специфичность – 100%. Показана 100% сходимость обнаружения и дифференциации ВГЧ-6А и ВГЧ-6В, полученных с помощью изучаемого набора реагентов и двух альтернативных референсных систем. Результаты подтверждены секвенированием по Сэнгеру. При тестировании панели контрольных образцов ДНК ВГЧ-6А/В установлено 100% совпадение результатов. Отечественный набор реагентов для видовой дифференциации ВГЧ-6А и ВГЧ-6В
методом ПЦР может быть использован как для диагностики, так и в эпидемиологических исследованиях.

Об авторах

Список литературы

1. Salahuddin S.Z., Ablashi D.V., Markham P.D., Josephs S. F., Sturzenegger S., Kaplan M. et al. Isolation of a new virus, HBLV, in patients with lymphoproliferative disorders. Science. 1986;
234(4776):596–601.
2. Wyatt L.S., Balachandran N., Frenkel N. Variations in the replication and antigenic properties of human herpesvirus 6 strains. J. Infect. Dis. 1990; 162(4):852–7.
3. Ablashi D.V., Balachandran N., Josephs S.F. Hung C.L., Krueger G.R., Kramarsky B. et al. Genomic polymorphism, growth properties, and immunologic variations in human herpesvirus-6 isolates. Virology. 1991; 184(2):545–52.
4. Ablashi D., Agut H., Berneman Z., Campadelli-Fiume G., Carrigan D., Ceccerini-Nelli L. et al. Human herpesvirus-6 strain groups: a nomenclature. Arch. Virol. 1993; 129(1):363–6.
5. Davison A., Pellett P., Stewart J. Rename species in the family Herpesviridae to incorporate a subfamily designation. ICTVonline. Code assigned: 2015.010aD.
6. Ablashi D., Agut H., Alvarez-Lafuente R., Clark D.A., Dewhurst S., DiLuca D. et al. Classification of HHV-6A and HHV-6B as distinct viruses. Arch. Virol. 2014 May; 159(5):863-70.
7. Dominguez G, Dambaugh TR, Stamey FR, Dewhurst S, Inoue N, Pellett PE. Human herpesvirus 6B genome sequence: coding content and comparison with human herpesvirus 6A. J. Virol. 1999; 73(10):8040–52.
8. Bates M., Monze M., Bima H., Kapambwe M., Clark D., Kasolo F.C. et al. Predominant human herpesvirus 6 variant A infant infections in an HIV-1 endemic region of Sub-Saharan Africa. J. Med. Virol. 2009; 81(5):779–89.
9. Leibovitch E.C., Brunetto G.S., Caruso B. Сoinfection of Human Herpesviruses 6A (HHV-6A) and HHV-6B as Demonstrated by Novel Digital Droplet PCR Assay. PLoS One. 2014; 9(3):1-12.
10. Jaworska J., Gravel A., Flamand L. Divergent susceptibilities of human herpesvirus 6 variants to type I interferons. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 2010; 107:8369–74.
11. Flamand L., Lautenschlager I., Krueger G. Ablashi D. Human Herpesviruses HHV-6A, HHV-6B, and HHV-7. Diagnosis and Clinical Management. 3rd ed. Elsevier UK; 2014.
12. Hall C.B., Caserta M.T., Schnabel K.C., Long C., Epstein L.G., Insel R.A. et al. Persistence of human herpesvirus 6 according to site and variant: possible greater neurotropism of variant A. Clin. Infect. Dis. 1998; 26(1):132–7.
13. Alvarez-Lafuente R., De Las Heras V., Bartolome M., Picazo J.J., Arroyo R. Relapsing-remitting multiple sclerosis and human herpesvirus 6 active infection. Arch. Neurol. 2004; 61(10):1523–7.
14. Chapenko S., Trociukas I., Donina S., Chistyakov M., Sultanova A., Gravelsina S. et al. Relationship between beta-herpesviruses reactivation and development of complications after autologous peripheral blood stem cell transplantation. J. Med. Virol. 2012;
84(12):1953–60.
15. Cone R.W., Huang M.L., Hackman R.C., Corey L. Coinfection with human herpesvirus 6 variants A and B in lung tissue. J. Clin. Microbiol. 1996; 34(4):877–81.
16. Pellett P.E., Ablashi D.V., Ambros P.F., Agut H., Caserta M.T., Descamps V. et al. Chromosomally integrated human herpesvirus 6: questions and answers. Rev. Med. Virol. 2012; 22(3) 144–55.
17. Nastke M.D., Becerra A., Yin L. Dominguez-Amorocho O., Gibson L., Stern L.J. al. Human CD4+ T cell response to human herpesvirus 6. J. Virol. 2012; 86:4776–92.
18. De Filippis L., Foglieni C., Silva S., Vescovi A.L., Lusso P., Malnati M.S. Differentiated human neural stem cells: a new ex vivo model to study HHV-6 infection of the central nervous system. J. Clin. Virol. 2006; 37(Suppl.1):27–32.
19. Gu B., Zhang G.F., Li L.Y., Zhou F., Feng D.J., Ding C.L. et al. Human herpesvirus 6A induces apoptosis of primary human fetal astrocytes via both caspase-dependent and -independent pathways. Virol. J. 2011; 8:530.
20. Mori Y., Seya T., Huang H.L. Akkapaiboon P., Dhepakson P., Yamanishi K. et al. Human herpesvirus 6 variant A but not variant B induces fusion from without in a variety of human cells through a human herpesvirus 6 entry receptor, CD46. J. Virol. 2002; 76:6750–61.
21. Tang H., Serada S., Kawabata A., Ota M., Hayashi E., Naka T. al. CD134 is a cellular receptor specific for human herpesvirus-6B entry. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2013; 110:9096–9.
22. Engdahl E., Gustafsson R., Huang J. Biström M., Lima Bomfim I., Stridh P. et al. Increased serological response against herpesvirus
6A is associated with risk for multiple sclerosis. Front. Immunol. 2019; 10:2715.
23. https://patents.google.com/patent/JP2003135100A/ en?oq=JP2003135100.
24. Landegren U., Kaiser R., Sanders J., Hood L.A. A Ligase-Mediated Gene Detection Technique. Science. 1988; 241:1077-80.
25. Griffin T. J., Hall J.G., Prudent J.R., Smith L.M. Direct genetic analysis by matrix-assisted laser desorptiony/ionization mass spectrometry. Proc. Natl. Acad. Sci. 1999; 25:6301-6.
26. Wang D.G., Fan J.B., Siao C.J., Berno A., Young P., Sapolsky R. et al. Large-Scale Identification, Mapping, and Genotyping of Single-Nucleotide Polymorphisms in the Human Genome. Science. 1998; 280:1077-82.
27. Saiki R.K., Scharf S., Faloona F., Mullis K.B., Horn G.T., Erlich H.A. et al. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science. 1985; 230:1350-4.
28. Livak K.J., Flood S.J., Marmaro J., Giusti W., Deetz K. Oligonucleotides with Fluorescent Dyes at Ends Provide a Quenched Probe System Useful for Detecting PCR Product and Nucleic Acid Hybridization. PCR Wethods. Appl. 1995; 4:357-62.
29. Ririe K.M., Rasmussen R.P., Wittwer C.T. Product Differentiation by Analysis of DNA Melting Curves during the Polymerase Chain Reaction. Anal. Biochem. 1997; 245:154-60.
30. Vedernikov V.E., Nikolskiy M.A., Vyazovaya A.A., Lioznov D.A., Narvskaya O.V. Identification method for a and b versions of human herpes virus 6. Patent RF № 2627607; 2017. (in Russian)
31. https://patents.google.com/patent/CN103820574B/en.
32. Yavarian J., Shatizadeh Malekshahi S., Yavarian R., Yazdani S., Janani L. et al. Type specific Real time PCR for detection of human herpes virus 6 in schizophrenia and bipolar patients: a case control study. BMC Psychiatry. 2015 Nov 20; 15:296.
33. Isegawa Y., Mukai T., Nakano K., Kagawa M., Chen J., Mori Y. et al. Comparison of the complete DNA sequences of human herpesvirus 6 variants A and B. J. Virol. 1999; 73(10):8053–63.
34. Melekhina E. V., Domonova E. A., Goptar` I. A., Shipulina O.Y., Gorelov A.V. First verified case of hereditary transmission of chromosomally integrated Human betaherpesvirus 6B. Voprosy prakticheskoy pediatrii. 2019; 14 (1):33-40. DOI: 10.20953/1817-7646-2019-1-33-40. (in Russian)
35. Domonova E.A., Sil`veystrova O.Yu., Goptar` I.A., Kuleshov K.V., Paskhina I.N., Nikiforova A.V. First laboratory confirmed case of hereditary transmission of chromosomally integrated
human betaherpesvirus 6A in the Russian Federation. Infektsionnye bolezni. 2019; 17(3): 5–14. DOI: 10.20953/1729-9225-2019-3-5- 14. (in Russian)
36. Borghesi A., Cipelletti P., Maragliano R., Manzoni P., Stronati M. Human herpesvirus-6 associated neonatal urticaria multiforme. Archives of Disease in Childhood. Fetal and Neonatal Edition. 2012; 98(5): F450.
37. Nikolskiy M.A., Vyazovaya A.A., Lioznov D.A., Narvskaya O.V., Smirnova N.N. The case of inherited chromosomal integrated human herpes virus type 6b in child with recurrent respiratory tract infections. Zhurnal Infektologii. 2020; 12(4):105-8. (in Russian)
38. Arbuckle J.H., Medveczky P.G. The molecular biology of human herpesvirus-6 latency and telomere integration. Microbes Infect. 2011; 13 (9): 731–41.
39. Melekhina E.Y., Lyseukova M.Yu., Svitich O.A., Muzyka A.D., Karazhas N.V., Rybalkina T.N. et al. Features of HHV-6A and HHV-6B infections in children living in the Moscow region. Epidemiologiya I infektsionnye bolezni. Aktual`nye voprosy. 2018; (2):42–9. (in Russian)
40. Vikulov G.K., Domonova E.A., Melekhina E.V., Sil`veystrova O.Yu., Kuleshov K.V. Inherited chromosomally integrated human herpesvirus 6B in a woman with herpesvirus infection and secondary immune deficiency. Infektsionnye bolezni. 2020; 18(4): 182–8.
DOI: 10.20953/1729-9225-2020-4-182-188. (in Russian)

Ключевые слова