Аннотация
Апробирован набор реагентов «C. diphtheriae Tox+» (ООО «ДНК-Технология ТС», Россия) для генодиагностики дифтерии. Использованы 15 типовых штаммов, в том числе токсигенный C. diphtheriae № 665, а также 285 штаммов и клинических образцов (мазки отделяемого из носо-, ротоглотки, кожных покровов), присланных в Референс-центр по мониторингу за корью, краснухой, эпидемическим паротитом, коклюшем и дифтерией ФБУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора. Культивирование проводили по МУК 4.2.3065-13. Для выделения ДНК использован «РИБО-преп» (ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора), «ПРОБА-НК», «ПРОБА-ГС» (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия),
«ПРОБА-МЧ-РАПИД», «ПРОБА-ОПТИМА» (ООО «ДНК-Технология ТС», Россия). В качестве сравнительной тест-системы использована «АмплиСенс® Corynebacterium diphtheriae / tox-genes-FL» (ФБУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора, Россия). Амплификацию проводили на ДТпрайм, ДТлайт, ДТ-96 (ООО «НПО ДНК-Технология»). Аналитическая чувствительность апробируемого набора после проведения амплификации составила 5 копий ДНК (103 ГЭ/мл). Диагностическая чувствительность составила 100% (92,9-100), диагностическая специфичность – 100% (97,6-100). В ходе сравнительных исследований с набором реагентов «АмплиСенс® Corynebacterium diphtheriae/tox-genes-FL» совпадение результатов
составило 100% с 95% доверительным интервалом 88,43-100%. Показано отсутствие перекрёстной реактивности в образцах биоматериала, содержащих другие микроорганизмы, выделенные из носо-, ротоглотки и с кожных покровов.
Список литературы
1. On the incidence of diphtheria, monitoring of the pathogen and the state of antitoxic antidiphtheria immunity of the Russian population in 2021. Information letter of Rospotrebnadzor dated 08.12.2022. № 02/23785-2022-27. (in Russian)
2. On the epidemiological situation and measures to prevent diphtheria in Russian Federation. Information letter of Rospotrebnadzor dated 16.01.2023. № 02/455-2023-27. (in Russian)
3. Statistical Methods for Rates and Proportions (2nd еd.) Section 5.6 (by Joseph L. Fleiss). Pub.: John Wiley & Sons, New York; 1981.
4. Pallen M.J. Rapid screening for toxigenic Corynebacterium diphtheriae by the polymerase chain reaction. Journal of Clinical Pathology. 1991; 44(12): 1025-6.
5. Narvskaya O.V., Mokrousov I.V. The use of polymerase chain reaction for the diagnosis of diphtheria and the study of the pathogen: a manual for doctors. St. Petersburg: Institute mikrobiologii I epidemiologii imeni Pastera; 1995. (in Russian)
6. Aravena-Roman M., Bowman R., O’Neill G. Polymerase chain reaction for the detection of toxigenic Corynebacterium diphtheriae. Pathology. 1995; 27(1): 71-3.
7. Efstratiou A., Engler K.H., Dawes C.S., Sesardic D. Comparison of phenotypic and genotypic methods for detection of diphtheria toxin among isolates of pathogenic corynebacterial. Journal of Clinical Microbiology. 1998; 36(11): 3173-7.
8. Mikhailovich V.M., Melnikov V.G., Mazurova I.K., Wachsmuth I.K., Wenger J.D., Wharton M. et al. Application of PCR for detection of toxigenic Corynebacterium diphtheriae strains isolated during the Russian diphtheria epidemic, 1990 through 1994. Journal of Clinical Microbiology. 1995; 33(11): 3061-3.
9. Nakao H., Popovic T. Development of a direct PCR assay for detection of the diphtheria toxin gene. Journal of Clinical Microbiology. 1997; 35(7): 1651-5.
10. Pallen M.J, Hay A.J., Puckey L.H., Efstratiou A. Polymerase chain reaction for screening clinical isolates of corynebacteria for the production of diphtheria toxin. Journal of Clinical Pathology; 1994; 47(4): 353-6.
11. Tseneva G.Ya., Shederkina E.E. Use of polymerase chain reaction in diagnosis of diphtheria infection. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunobiologii. 2000; 5: 72-4. (in Russian)
12. Kombarova S.Yu., Mel`nikov V.G., Borisova O.Yu., Platonova T.V., Sokov B.N, Smerdov G.N. et al. Improvement of polymerase chain reaction procedure for detection of diphtheria toxin gene. Problemy infektsionnykh bolezney. 2000; 1: 47-52. (in Russian)
13. Cassiday P.K., Pawloski L.C., Tiwari T., Sanden G.N., Wilkins P.P. Analysis of toxigenic Corynebacterium ulcerans strains revealing potential for false-negative real-time PCR results. Journal of Clinical Microbiology. 2008; 46(1): 331-3.
14. Schuhegger R., Lindermayer M., Kugler R., Heesemann J., Bursch U., Sing A. Detection of toxigenic Corynebacterium diphtheriae and Corynebacterium ulcerans strains by a novel real-time PCR. Journal of Clinical Microbiology. 2008; 46(8): 2822-3.
15. Sing A., Berger A., Schneider-Brachert W., Holzmann T., Reischl U. Rapid detection and molecular differentiation of toxigenic Corynebacterium diphtheriae and Corynebacterium ulcerans strains by LightCycler PCR. Journal of Clinical Microbiology. 2011; 49(7): 2485-9.
16. Mancini F., Monaco M., Pataracchia M., von Hunolstein C., Pantosti A., Ciervo A. Identification and molecular discrimination of toxigenic and nontoxigenic diphtheria Corynebacterium strains by combined real-time polymerase chain reaction assays. Diagnostic
Microbiology and Infectious Disease. 2012; 73(2): 111-20.
17. Mothershed E.A., Cassiday P.K., Pierson K., Mayer L.W., Popovic T. Development of a real-time fluorescence PCR assay for rapid detection of the diphtheria tox in gene. Journal of Clinical Microbiology. 2002; 40(12): 4713-9.
18. Vasil`ev D.A., Mastilenko A.V., Borisova O.Yu., Poletaeva T.N., Makshanova N.V. Development of the molecular genetic identification system Corynebacterium ulcerans based on real-time PCR. Molekulyarnaya diagnostika. 2014; 2(27): 487-8. (in Russian)
19. Kharseeva G.G., Alutina E.L., Gasretova T.D., Dyatlov I.A. Diphtheria: microbiological and immunological aspects. Moscow: Prakticheskaya meditsina; 2014. ISBN 978-5-98811-277-8. (in
Russian)
20. Pimenta F.P., Hirata Jr., Rosa A.C., Milagres L.G., Mattos-Guaraldi A.L. А multiplex PCR assay for simultaneous detection of Corynebacterium diphtheriae and differentiation between non-toxigenic and toxigenic isolates. Journal of Medical Microbiology. 2008; 57(11): 1438-9.
21. Torres Lde.F., Ribeiro D., Hirata Jr.R., Pacheco L.G., Souza M.C., dos Santos L.S. et al. Multiplex polymerase chain reaction to identify and determine the toxigenicity of Corynebacterium spp. with zoonotic potential and an overview of human and animal infections.
Memorias do Instituto Oswaldo Cruz. 2013; 108(3): 272-9.