ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МЕТОДОВ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИМИТОХОНДРИАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ПРИ ПЕРВИЧНОМ БИЛИАРНОМ ХОЛАНГИТЕ

Аннотация

Антимитохондриальные антитела (АМА) — гетерогенная группа аутоантител, реагирующих с различными белками мембран митохондрий. При первичном билиарном холангите (ПБХ) АМА вырабатываются преимущественно к антигену внутренней мембраны митохондрий М2. АМА/АМА-М2 служат основными иммунологическими маркёрами ПБХ.
Цель исследования — сравнить диагностическое значение методов определения АМА/АМА-М2 у больных ПБХ и ПБХ в сочетании с аутоиммунным гепатитом (АИГ) (ПБХ/АИГ).
Исследованы сыворотки 19 больных ПБХ, 48 — перекрёстным синдромом ПБХ/АИГ, 30 — неалкогольной жировой болезнью печени (НАЖБП) и 30 здоровых доноров (ЗД). Определение АМА/АМА-М2 осуществлялось с помощью непрямой реакции иммунофлюоресценции на тканевом комплексе криосрезов печени/почек/желудка мыши и на HЕp-2 клетках (НРИФ-ТК и НРИФ-HЕp-2), иммуноферментного анализа (ИФА), иммуноблота (ИБ).
Частота обнаружения и уровни АМА/АМА-М2 в сыворотках больных ПБХ и ПБХ/АИГ, определяемые методами НРИФ-ТК, НРИФ-HEp-2, ИФА и ИБ, не различались при данных патологических состояниях и превышали эти показатели при НАЖБП и у ЗД. Отмечена «умеренная» степень согласованности результатов исследования АМА/АМА-М2 методами НРИФ-ТК, НРИФ-HEp-2, ИФА, ИБ (æ=0,48-0,60). Методы определения АМА/АМА-М2 на основе НРИФ-ТК и НРИФ-HEp-2 являлись наиболее чувствительными и «полезными» скрининговыми тестами для диагностики ПБХ. При ПБХ/АИГ на этапе скрининга АМА/АМА-М2 наиболее высокие показатели диагностической чувствительности и эффективности демонстрировал ИФА, в то время как метод НРИФ-HEp-2 был менее «полезным», а НРИФ-ТК — недостаточно эффективным тестом. ИФА и ИБ служили «полезными» подтверждающими тестами для диагностики ПБХ и ПБХ/АИГ у лиц с положительными результатами скринингового определения АМА/АМА-М2 в НРИФ-ТК и НРИФ-HEp-2. Для повышения ДЧ и уменьшения количества АМА-негативных результатов при ПБХ и ПБХ/АИГ целесообразно использовать ИФА не только в качестве подтверждающего, но и скринингового теста в комбинации с выявлением АМА/АМА-М2 методами НРИФ-ТК и НРИФ-HEp-2.

Annotation

Anti-mitochondrial antibodies (AMA) are a heterogeneous group of autoantibodies that react with various mitochondrial membrane proteins. In primary biliary cholangitis (PBC), AMA are produced predominantly to the inner mitochondrial membrane antigen M2. AMA/AMA-M2 are the main immunological marker of PBC.
The aim of the study was to compare the diagnostic value of methods for detecting AMA/AMA-M2 in patients with PBC and PBC-autoimmune hepatitis overlap syndrome (PBC-AIH OS).
The sera of 19 patients with PBC, 48 with PBC-AIH OS, 30 with non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD) and 30 healthy donors (HD) were studied. Detection of AMA/AMA-M2 was carried out using indirect immunofluorescence on a tissue complex of mouse liver/kidney/stomach cryostat sections and on HEp-2 cells (IIF-T and IIF-HEp-2), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), immunoblot (IB).
The frequency of detection and levels of AMA/AMA-M2 in the sera of patients with PBC and PBC-AIH OS, determined using IIF-T,IIF-HEp-2, ELISA and IB, did not differ in these pathological conditions and significantly exceeded these indicators in NAFLD and in HD. A «moderate» degree of agreement between the results of the AMA/AMA-M2 study using IIF-T, IIF-HEp-2, ELISA and IB methods was noted (æ = 0.48-0.60). Methods for determining AMA/AMA-M2 using IIF-T and IIF-HEp-2 were the most sensitive and «useful» primary screening tests for the diagnosis of PBC. In PBC-AIH OS at the screening stage of AMA/AMA-M2, the highest rates of sensitivity and diagnostic value were demonstrated by ELISA, while the IIF-HEp-2 method was less «useful», and IIF-T was an ineffective test. ELISA and IB methods served as «useful» confirmatory tests for the diagnosis of PBC and PBC-AIH OS in individuals with positive screening results for AMA/AMA-M2 in IIF-T and IIF-HEp-2. To increase the sensitivity and reduce the number of AMA-negative results in PBC and PBC-AIH OS, it is advisable to use ELISA not only as a confirmatory test, but also as a screening test in combination with the detection of AMA/AMA-M2 using the IIF-T and IIF-HEp-2 methods.
Key words: primary biliary cholangitis; overlap syndrome; anti-mitochondrial antibodies (АМА)/M2 subtype (AMA-M2); indirect immunofluorescence reaction; enzyme-linked immunosorbent assay; immunoblot; diagnostic value.

Об авторах

Список литературы

1.European Association for the Study of the Liver. EASL clinical practice guidelines: The diagnosis and management of patients with primary biliary cholangitis. J. Hepatol. 2017; 67:145–72. DOI: 10.1016/j. jhep.2017.03.022.
2.Lindor K.D., Bowlus C.L., Boyer J., Levy C., Mayo M. Primary biliary cholangitis: 2021 practice guidance update from the American Association for the Study of Liver Diseases. Hepatology. 2022; 75(4):1012-3. DOI: 10.1002/hep.32117.
3.Bowlus C.L., Gershwin M.E. The diagnosis of primary biliary cirrhosis. Autoimmun. Rev. 2014; 13(4-5):441-4. DOI: 10.1016/j.autrev.2014.01.041
4.Yamagiwa S., Kamimura H., Takamura M., Aoyagi Y. Autoantibodies in primary biliary cirrhosis: recent progress in research on the pathogenetic and clinical significance. World J. Gastroenterol. 2014; 20(10):2606-12. DOI: 10.3748/wjg.v20.i10.2606.
5.Muñoz-Sánchez G., Pérez-Isidro A., Ortiz de Landazuri I., López-Gómez A., Bravo-Gallego L. Y., Garcia-Ormaechea M. et al. Working algorithms and detection methods of autoantibodies in autoimmune liver disease: a nationwide study. Diagnostics (Basel). 2022; 12(3):697. DOI: 10.3390/diagnostics12030697.
6.Bogdanos D.P, Invernizzi P, Mackay I.R, Vergani D. Autoimmune liver serology: current diagnostic and clinical challenges. World J. Gastroenterol. 2008; 14(21):3374-87. DOI: 10.3748/wjg.14.3374.
7.Damoiseaux J., Andrade L.E.C., Carballo O.G., Conrad K., Francescantonio P.L.C., Fritzler M.J. et al. Clinical relevance of HEp-2 indirect immunofluorescent patterns: the International Consensus on ANA patterns (ICAP) perspective. Ann. Rheum. Dis. 2019; 78(7):879-89. DOI: 10.1136/annrheumdis-2018-214436.
8.Aleksandrova E.N., Dorofeev A.S., Novikov A.A., Sandler Yu.G. Аutoantibodies in autoimmune liver diseases (review of literature). Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika. 2023; 68(8):464-74. DOI: 10.51620/0869-2084-2023-68-8-464-474. (in Russian)
9.Sebode M., Weiler-Normann C., Liwinski T., Schramm C. Autoantibodies in autoimmune liver disease-clinical and diagnostic relevance. Front Immunol. 2018; 9:609. DOI: 10.3389/fimmu.2018.00609.
10.Gaiani F., Minerba R., Picanza A., Russo A., Melegari A., De Santis E. et al. Optimization of laboratory diagnostics of primary biliary cholangitis: when solid-phase assays and immunofluorescence combine. J. Clin. Med. 2022; 11(17):5238. DOI: 10.3390/jcm11175238.
11.Hu S.; Zhao F.; Wang Q.; Chen W.X. The accuracy of the anti-mitochondrial antibody and the M2 subtype test for diagnosis of primary biliary cirrhosis: а meta-analysis. Clin. Chem. Lab. Med. 2014; 52: 1533–42. DOI: 10.1515/cclm-2013-0926.
12.Zhang W., De D., Mohammed K.A., Munigala S., Chen G., Lai J.-P., Bacon B.R. New scoring classification for primary biliary cholangitis-autoimmune hepatitis overlap syndrome. Hepatol. Commun. 2018; 2(3):245-53. DOI: 10.1002/hep4.1148.
13.Tsuneyama K., Baba H., Kikuchi K., Nishida T., Nomoto K., Hayashi S. et al. Autoimmune features in metabolic liver disease: a single-center experience and review of the literature. Clin. Rev. Allergy Immunol. 2013; 45 (1):143-8. DOI: 10.1007/s12016-013-8383-x.

Ключевые слова