ХАРАКТЕРИСТИКИ ПИРОГАЛЛОЛОВО-МОЛИБДЕНОВОГО РЕАГЕНТА: ОСАЖДЕНИЕ И ОКРАСКА БЕЛКОВ В РАСТВОРЕ И НА ЭЛЕКТРОФОРЕГРАММАХ

Аннотация

Исследованы свойства реагента пирогаллол красный-молибдат-карбинол (PRMM). Было определено (на модельных смесях белка), что компромиссное соотношение образец/реагент для определения белка, с одной стороны, и его осаждения, с другой стороны, составляет 1/9. При этом условии предел обнаружения и предел количественного определения близки к 0,04 г/л; выход белка составляет 50-70%. В случае окрашивания ДСН-ПАА гелей или агарозных гелей чувствительность реагента PRMM ниже чувствительности красителя Coomassie R-250 или красителя Acid Violet. Однако, при использовании PRMM отклик линеен от 0,5 мкг до 6 мкг БСА на полосу, что является привлекательным для полуколичественного электрофоретического анализа белков. В случае проб мочи CV% был равен 9,3%. Концентрации белка в образцах мочи, измеренных с помощью PRMM, были близки к результатам клинической лаборатории для концентраций 0,2-0,4 г / л

Об авторах

Список литературы

1. Fujita Y., Mon I., Kitano S. Color reaction between pyrogallol redmolybdenum(VI) complex and protein. Bunseki Kagaku. 1983; 32: E379-E386.
2. Watanabe N., Kamel S., Ohkubo A., Yamanaka M., Ohsawa S., Makino K., Tokuda K. Urinary protein as measured with a Pyrogallol-Red-molybdate complex manually and in a Hitachi 726 automated analyzer. Clin. Chem. 1986; 32: 1551-4.
3. Marshall T., Abbott N.J., Fox P., Williams K.M. Protein concentration by precipitation with pyrogallol red prior to electrophoresis. Electrophoresis. 1995; 16: 28-31. DOI:10.1002/elps.1150160107.
4. Caldwell R.B., Lattemann C.T. Simple and reliable method to precipitate proteins from bacterial culture supernatant. Appl. Environ. Microbiol. 2004 Jan; 70 (1): 610-2. DOI: 10.1128/AEM.70.1.610-612.2004.
5. IUPAC. Compendium of Chemical Terminology, 2nd ed. (the “Gold Book”). Compiled by A. D. McNaught, A. Wilkinson. Blackwell Scientific Publications, Oxford (1997). Online version (2019) created by S. J. Chalk. ISBN 0-9678550-9-8. https://doi.org/10.1351/goldbook.
6. ICH harmonised tripartite guideline validation of analytical procedures: text and methodology Q2(R1). https://database.ich.org/sites/default/files/Q2_R1__Guideline.pdf.
7. Afkarian M., Bhasin M., Dillon S.T., Guerrero M.C., Nelson R.G., Knowler W.C., Thadhani R., Libermann T.A. Optimizing a proteomics platform for urine biomarker discovery. Mol. Cell Proteomics. 2010; 9(10): 2195-2204. DOI:10.1074/mcp.M110.000992.
8. Westgard Quality Requirements. https://www.westgard.com/biodatabase1.htm.

Ключевые слова