Аннотация
В настоящее время при наличии широких диагностических возможностей лабораторная диагностика нарушения микроэкологического состояния вагинального биотопа зачастую ограничивается клиническими данными, результатми микроскопических исследований и применением культурального метода. Однако, при таком комплексе нельзя получить ответ о функциональной активности микроорганизмов. Цель исследования — оценить информативность сочетанного изучения параметров роста и способности продуцировать молочную кислоту клиническими штаммами Lactobacillus spp. для характеристики состояния микроэкологии цервикально-вагинального биотопа. Изучали кинетику роста штаммов лактобактерий, изолированных из отделяемого заднего свода влагалища. Концентрацию молочной кислоты в среде определяли при помощи набора «Молочная кислота — Ольвекс» (Россия). Пробы отбирали через каждые 12 часов культивирования. Статистический анализ результатов проводили с использованием методов описательной статистики, t-критерия Стьюдента. Показано, что 44% штаммов Lactobacillus spp. к 72 часу культивирования не достигали фазы экспоненциального роста. Остальные штаммы с 12-24 часа переходили в фазу экспоненциального роста. По продукции молочной кислоты штаммы, находящиеся в лаг-фазе, не отличались друг от друга, поскольку практически не синтезировали этот метаболит. Среди остальных штаммов, находящихся в фазе экспоненциального роста, одни — не продуцировали молочную кислоту, другие с каждым часом наращивали продукцию лактата. Часть штаммов к 36 часу вышла на пик продукции кислоты и к 72 ч наблюдался некоторый спад синтетической активности. Показано, что для большинства вагинальных штаммов Lactobacillus spp. характерна вариабельность длительности периода адаптации и уровня функциональной активности. Кроме этого, лишь небольшое число клинических штаммов продуцировали молочную кислоту через 24 ч от начала культивирования. Следовательно, для адекватной оценки микроэкологического статуса вагинального биотопа недостаточно проведения микроскопического изучения как нативного материала, так и культур, изолируемых на специальных питательных средах. Представляется, что, наряду с использованием современных методов генетического анализа, определение in vitro ростовых характеристик, в первую очередь продолжительности лаг-фазы, и продукции лактата штаммами молочнокислых бактерий сможет прояснить многие вопросы, связанные с формированием дисбиотических состояний, в частности в вагинальном биотопе, а также послужит повышению эффективности назначаемого при этом лечения.
Список литературы
Фоменко Н.В., Хворостова Ю.В., Игнатьева О.А., Акимов И.А., Трухина А.В., Гасилова Н.А. и др. Видовое разнообразие микрофлоры в пробах из урогенитального тракта пациенток крупной сетевой лаборатории и его зависимость от содержания лактобактерий. Клиническая лабораторная диагностика. 2015; 60(3): 59-64.
Лисяна Т.А., Пономарева И.Г., Кацалап О.Н., Тимофеева А.Ю. Микроэкология половых путей у женщин с бесплодием хламидийной этиологии. Клиническая лабораторная диагностика. 2016; 61(12): 853-7.
Anahtar M.N., Gootenberg D.B., Mitchell C.M., Kwon D.S. Cervicovaginal Microbiota and Reproductive Health: The Virtue of Simplicity. Cell Host Microbe. 2018; 23(2): 159-68.
Döderlein A. Das Scheidensekret und seine Bedeutung für das puerperalfieber. Leipzig: E. Besold; 1892.
Мавзютов А.Р., Цветкова А.В., Нуретдинова Л.А. Об унификации лабораторных критериев дифференцировки бактериальных вагинозов. Клиническая лабораторная диагностика. 2015; 60(6): 41-5.
Cruickshank R., Sharman A. The biology of the vagina in the human subject. BJOG: An. International Journal of Obstetrics and Gynaecology. 1934; 41(2): 208-26.
Nugent R.P., Krohn M.A., Hillier S.L. Reliability of diagnosing bacterial vaginosis is improved by a standardized method of gram stain interpretation. Journal of Clinical Microbiology. 1991; 29(2): 297-301.
Spiegel C.A., Amsel R., Holmes K.K. Diagnosis of bacterial vaginosis by direct gram stain of vaginal fluid. Journal of Clinical Microbiology. 1983; 18(1): 170-7.
Бондаренко К.Р., Хасанова Г.Ф., Гайсина Ю.Р., Гараева Л.Н., Мавзютов А.Р. Культуральный метод в диагностике бактериального вагиноза. Клиническая лабораторная диагностика. 2007; 9: 70.
Цветкова А.В., Муртазина З.А., Маркушева Т.В., Мавзютов А.Р. Сравнительный анализ информативности основных клинических критериев, используемых для диагностики бактериального вагиноза. Клиническая лабораторная диагностика. 2015; 60(5): 41-4.
Amabebe E., Anumba D.O.C. The Vaginal Microenvironment: The Physiologic Role of Lactobacilli. Front Med (Lausanne). 2018; 5: 181.
Мандрыкина Н.Е., Щербо С.И., Тогузов Р.Т. Разработка и применение методов генодиагностики бактериального вагиноза у беременных женщин. Клиническая лабораторная диагностика. 2007; 9: 73.
Fettweis J.M., Brooks J.P., Serrano M.G., Sheth N.U., Girerd P.H., Edwards D.J. et al. Differences in vaginal microbiome in African American women versus women of European ancestry. Microbiology. 2014; 160(Pt 10): 2272-82.
Madhivanan P., Raphael E., Rumphs A., Krupp K., Ravi K., Srinivas V. et al. Characterization of culturable vaginal Lactobacillus species among women with and without bacterial vaginosis from the United States and India: a cross-sectional study. J. Med. Microbiol. 2014; 63(Pt 7): 931-5.
Fredricks D.N., Fiedler T.L., Marrazzo J.M. Molecular identification of bacteria associated with bacterial vaginosis. N. Engl. J. Med. 2005; 353: 1899-1911.
Srinivasan S., Hoffman N.G., Morgan M.T., Matsen F.A., Fiedler T.L., Hall R.W. et al. Bacterial communities in women with bacterial vaginosis: high resolution phylogenetic analyses reveal relationships of microbiota to clinical criteria. PLoS One. 2012; 7: e37818.
Teixeira G.S., Carvalho F.P., Arantes R.M., Nunes A.C., Moreira J.L., Mendonça M. et al. Characteristics of Lactobacillus and Gardnerella vaginalis from women with or without bacterial vaginosis and their relationships in gnotobiotic mice. J. Med. Microbiol. 2012; 61: 1074-81.
Verstraelen H., Verhelst R., Nuytinck L., Roelens K., De Meester E., De Vos D. et al. Gene polymorphisms of Toll-like and related recognition receptors in relation to the vaginal carriage of Gardnerella vaginalis and Atopobium vaginae. J. Reprod. Immunol. 2009; 79: 163-73.
Konings W.N., Kok J., Kuipers O.P., Poolman B. Lactic acid bacteria: the bugs of the new millennium. Curr. Opin Microbiol. 2000; 3(3): 276-82.
Borges S., Silva J., Teixeira P. The role of lactobacilli and probiotics in maintaining vaginal health. Arch. Gynecol. Obstet. 2014; 289(3): 479-89.
O’Hanlon D.E., Moench T.R., Cone R.A. In vaginal fluid, bacteria associated with bacterial vaginosis can be suppressed with lactic acid but not hydrogen peroxide. BMC Infect. Dis. 2011; 11: 200.
Kaewsrichan J., Peeyananjarassri K., Kongprasertkit J. Selection and identification of anaerobic lactobacilli producing inhibitory compounds against vaginal pathogens. FEMS immunology and medical microbiology. 2006; 48: 75-83.
Wilks M., Wiggins R., Whiley A., Hennessy E., Warwick S., Porter H. et al. Identification and H2O2 Production of Vaginal Lactobacilli from Pregnant Women at High Risk of Preterm Birth and Relation with Outcome. J. Clin. Microbiol. 2004; 42(2): 713-7.
Quatravaux S., Remize F., Bryckaert E., Colavizza D., Guzzo J. Examination of the Lactobacillus plantarum lactate metabolism side effects in relation to the modulation of aeration parameters. J. Appl. Microbiol. 2006; 101: 903-12.
Juárez Tomás M.S., Wiese B., Nader-Macías M.E. Effects of culture conditions on the growth and auto-aggregation ability of vaginal Lactobacillus johnsonii CRL 1294. J. Appl. Microbiol. 2005; 99(6): 1383-91.
Бухарин О.В. Инфекционная симбиология — новое понимание старых проблем. Вестник Российской академии наук. 2016; 86(10): 915-20.
Abdelmaksoud A.A., Koparde V.N., Sheth N.U., Serrano M.G., Glascock A.L., Fettweis J.M. et al. Comparison of Lactobacillus crispatus isolates from Lactobacillus-dominated vaginal microbiomes with isolates from microbiomes containing bacterial vaginosis-associated bacteria. Microbiology. 2016; 162(3): 466-75.