Аннотация
Целью данного исследования была оценка возможности применения метода тромбининдуцированного увеличения концентрации Ca в цитоплазме Fluo-3-окрашенных тромбоцитов в качестве экспериментальной модели для изучения механизма действия антитромбоцитарных препаратов in vitro. Влияние антитромбоцитарных веществ на тромбининдуцированное увеличение уровня цитоплазматического Ca в тромбоцитах изучали на примере ацетилсалициловой кислоты (АСК). Измерение концентрации цитоплазматического Ca проводили методом проточной цитометрии с помощью флуоресцентного зонда Fluo-3 АМ. Установлено, что в данном тесте АСК ингибирует тромбининдуцированное увеличение цитоплазматического Ca при концентрациях 0,125-5,0 мк/моль. Это свидетельствует о том, что в механизме действия АСК угнетение тромбоксанового пути перестает быть ведущим. Предложенный нами методический подход позволяет оценить антитромбоцитарный эффект веществ по их влиянию на уровень цитоплазматического Ca в тромбоцитах in vitro, однако обладает рядом ограничений, препятствующих широкому применению данного метода.
Об авторах
Васина Любовь ВасильевнаФГБУ «Северо-Западный федеральный медицинский исследовательский центр им. В.А. Алмазова» Минздрава РФ 197341, Санкт-Петербург д-р мед. наук, ст. науч. сотр. лаб. микроциркуляции lubov.vasina@gmail.com
Список литературы
Paredes R.M., Etzler J.C., Watts L.T., Zheng W., Lechleiter J.D. Chemical calcium indicators. Methods. 2008; 46(3): 143-51.
Nesbitt W.S., Harper I.S., Schoenwaelder S.M., Yuan Y., Jackson S.P. A live cell micro-imaging technique to examine platelet calcium signaling dynamics under blood flow. Methods Mol. Biol. 2012; 788: 73-89.
Merritt J.E., McCarthy S.A., Davies M.P., Moores K.E. Use of fluo-3 to measure cytosolic Ca2+ in platelets and neutrophils. Biochem. J. 1990; 269(2): 513-9.
Do Céu Monteiro M., Sansonetty F., Gonçalves M.J., O’Connor J.E. Flow cytometric kinetic assay of calcium mobilization in whole blood platelets using Fluo-3 and CD 41. Cytometry. 1999; 35(4): 302-10.
Wave J.A., Smith M., Salzman E.W. Synergism of plateletaggregating agents. Role of elevation of cytoplasmic calcium. J. Clin. Invest. 1987; 80(1): 267-71.
Shen Z.Q., Chen Z.H., Ma G.Y., Wang D.C., Wu W.L., Liu W.P. et al. Inhibitory effects of copper-aspirin complex on platelet aggregation. Acta Pharmacol. Sin. 1997; 18(4): 358-62.
Shen Z.Q., Li L., Wu L.O., Chen Z.H., Liu W.P. Effects of copperaspirin complex on plasma prostaglandin F1α level and platelet cytosolic calcium in rabbits. Platelets. 1999; 10(5): 345-8.
Hecker M., Brüne B., Decker K., Ullrich V. The sulfhydryl reagent thimerosal elicits human platelet aggregation by mobilization of intracellular calcium and secondary prostaglandin endoperoxide formation. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1989; 159(3): 961-8.
Holinstat M., Voss B., Bilodeau M.L., McLaughlin J.N., Cleator J., Hamm H.E. PAR 4, but not PAR 1, signals human platelet aggregation via Ca2+ mobilization and synergistic P2Y12 receptor activation. J. Biol. Chem. 2006; 281(36): 26665-74.
Holinstat M., Voss B., Bilodeau M.L., Hamm H.E. Protease-activated receptors differentially regulate human platelet activation through a phosphatidic acid-dependent pathway. Mol. Pharmacol. 2007; 71(3): 686-94.
Wallace J.L., McKnight W., Del Soldato P., Baydoun A.R., Cirino G. Anti-thrombotic effects of a nitric oxide — releasing, gastric-sparing aspirin derivative. J. Clin. Invest. 1995; 96(6): 2711-8.