Аннотация
Целью работы являлось создание рекомбинантного химерного белка с использованием системы вектор — хозяин Brevibacillus choshinensis (TAKARA, Япония) со встроенным слитным геном dbpAG, состоящим из частей генов dbpA и dbpG, которые кодируют главные антигенные детерминанты декорин-связывающих белков А (DbpA) двух видов возбудителей клещевых боррелиозов — Borrelia afzelii и Borrelia gаrinii. Такая плазмида должна обеспечить синтез и секрецию в культуральную жидкость стабильного рекомбинантного антигена, состоящего из двух доменов — DbpA B. afzelii (DbpAА) и B. gаrinii (DbpАAG) — в нативной конформации и растворимой форме, что важно для его эффективного применения в серодиагностике боррелиозов. Выбор экспрессионной системы TAKARA на основе штамма Brevibacillus choshinensis и плазмиды pNCMO2 обусловлен возможностью получения секретируемых целевых белков в растворимом виде в нативной конформации и с сохранёнными антигенными детерминантами. Сконструирована плазмида pNCMO2 со слитным геном dbpAAG, которой был трансформирован штамм Brevibacillus choshinensis. Полученный рекомбинантный клон Brevibacillus сhoschinensis/pNCMO2/dbpАAG при культивировании в жидкой питательной среде продуцирует секретируемый белок, который имеет мол. массу около 30кД и обладает высокой иммунореактивностью с сыворотками от больных с подтверждённым диагнозом «боррелиоз».
Список литературы
Hu L.T. In the clinic. Lyme disease. Ann. Intern. Med. 2012; 157(3): 2-16.
Stanek G., Fingerle V., Hunfeld K.P, Jaulhac B., Kaiser R., et al. Lyme borreliosis: clinical case definitions for diagnosis and management in Europe. Clin. Infect. 2011; 17(1): 69-79.
Stanek G., Wormser G.P., Gray J., Strle F. Lyme borreliosis. Lancet. 2012; 379(9814): 461-73.
Brouqui P., Bacellar F., Baranton G., Birtles R.J., Bjoersdorff A., et al. Guidelines for the diagnosis of tick-borne bacterial diseases in Europe. Clin. Microbiol. Infect. 2004; 10(12): 1108-32.
Wilske B., Fingerle V., Schulte-Spechtel U. Microbiological and serological diagnosis of Lyme borreliosis. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2007; 49(1): 13-21.
Ang C.W., Notermans D.W., Hommes M., Simoons-Smit A.M., Herremans T. Large differences between test strategies for the detection of anti-Borrelia antibodies are revealed by comparing eight ELISAs and five immunoblots. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2011; 30(8): 1027-32.
Hauser U., Lehnert G., Lobentanzer R., Wilske B. Interpretation criteria for standardized Western blots for three European species of Borrelia burgdorferi sensu lato. J. Clin. Microbiol. 1997; 35(6): 1433-44.
Hunfeld K.P., Kraiczy P. When is the best time to order a Western blot and how should it be interpreted? Curr. Probl. Dermatol. 2009; 37: 167-77.
Goettner G., Schulte-Spechtel U., Hillermann R., Liegl G., Wilske B., et al. Improvement of Lyme borreliosis serodiagnosis by a newly developed recombinant immunoglobulin G (IgG) and IgM line immunoblot assay and addition of VlsE and DbpA homologues. J.Clin. Microbiol. 2005; 43(8): 3602-9.
Gerritzen A., Brandt S. Serodiagnosis of Lyme borreliosis with bead based immunoassays using multiplex technology. Methods. 2012; 56 (4): 477-83.
Porwancher R.B., Hagerty C.G., Fan J., Landsberg L., Johnson B.J, et al. Multiplex immunoassay for Lyme disease using VlsE1-IgG and pepC10-IgM antibodies: improving test performance through bioinformatics. Clin. Vaccine Immunol. 2011; 18(5): 851-9.
Беклемишев А.Б., Рябченко А.В., Караваев В.С. Рекомбинантные химерные полипептиды, несущие эпитопы различных иммунодоминантных белков спирохет комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato и способ диагностики иксодового клещевого боррелиоза. Патент РФ № 2514230; 2014.
Leve Lionel., Mezhan-Leturnel Odil. Химерный белок, используемый для диагностики лайм-боррелиоза. Патент РФ № 2546246; 2015.
Leve Lionel., Mezhan-Leturnel Odil. Химерный белок боррелии, нуклеиновая кислота, кодирующая такой белок, экспрессирующая кассета, вектор, способ и набор для диагностики лайм-боррелиоза, вакцина для профилактики боррелиоза. Патент РФ № 2549698; 2015.
Heikkila Т., Seppala I., Saxen H., Panelius J., Yrjanainen H., Lahdenne P. Species-specific serodiagnosis of Lyme arthritis and neuroborreliosis due to Borrelia burgdorferi sensu stricto, B.afzelii, and B.garinii by using decorin binding protein A . J. Clin. Microbiol. 2002; 40(2): 453-60
Коренберг Э.И., Горелова Н.Б., Ковалевский Ю.В. Основные черты природной очаговости иксодовых клещевых боррелиозов в России. Паразитология. 2002; 36 (3): 177-87
Baranova E., Solov Ev P., Panfertsev E., Baranova A., Feduykina G., Kolombet L., Morshed M. G., Biketov S. Rational design of antigens to improve the serodiagnosis of tick-borne borreliosis in central regions of Russia. Adv. Exp. Med. Biol. 2014; 807: 9-21.
Makoto M., Hiroshi H., Miyauchi A. Brevibacillus Expression System: Host-Vector System for Efficient Production of Secretory Proteins. Curr. Pharm. Biotechnol. 2010; 11(3), 251-8.
Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 1970; 227(5259): 680-5.