Контаминация при ЦПР-исследованиях: проблемы и решения

Аннотация

Целью исследования было определение факторов риска получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов при ПЦР-анализе клинического материала. Источником ложноположительных результатов могут быть образцы с высокой вирусной нагрузкой. Контаминация нуклеиновыми кислотами (НК) может произойти на любом участке ПЦР-исследования. На основании полученных данных мы установили, что наиболее чувствительным этапом является выделение и очистка НК, особенно если она проводится в ручном режиме. Если в одной постановке в подавляющем большинстве образцов детектируется положительный сигнал, это указывает на тотальную контаминацию. Но особую сложность представляют такие случаи, когда загрязненными оказываются лишь несколько образцов. Если в одной постановке присутствуют образец с высокой концентрацией вирусной НК и несколько проб с низкой концентрацией, следует провести их повторный анализ, начиная с этапа выделения НК. Обязательным этапом ПЦР-исследования в режиме реального времени является анализ кривых накопления продуктов амплификации: их формы и расположения на графике. Эти действия позволят исключить выдачу в клинические подразделения ложно отрицательных результатов тестирования. Все сделанные в работе выводы равноценны для ПЦР-тестирования любых НК-мишеней.

Об авторах

Список литературы

Методические рекомендации по проведению работ в диагностических лабораториях, использующих метод полимеразной цепной реакции. Основные положения. Утверждено заместителем председателя Госкомсанэпиднадзора Г.Г. Онищенко 22 июня 1995 г. N06-19/52-17, Москва.

Методические указания МУ 1.3.1888-04 «Организация работы при исследованиях методом ПЦР материала, инфицированного патогенными биологическими агентами III-IV групп патогенности». Утверждено Главным государственным санитарным врачом РФ Г.Г. Онищенко, 04.03.2004 г., Москва.

Bogard M., Buffet-Janvresse C., Cantaloube J.F., Biagini P., Duverlie G., Castelain S. et al. J. Clin. Microbiol. 1997; 35: 3298-300.

Borst А., Box A.T.A., Fluit A.C. False-positive results and contamination in nucleic acid amplification assays: suggestions for a prevent and destroy strategy. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. 2004; 23: 289-99.

Lo Y.M., Mehal W.Z., Fleming K.A. False-positive results and the polymerase chain reaction. Lancet. 1988; 2: 679.

Ключевые слова