Научно-практический журнал Клиническая лабораторная диагностика

МЕТОД КОЛИЧЕСТВЕННОЙ ОЦЕНКИ КОЛЬЦЕВОЙ КОВАЛЕНТНО-ЗАМКНУТОЙ ДНК ВГВ В ПУНКЦИОННЫХ БИОПТАТАХ ПЕЧЕНИ

Останкова Юлия Владимировна

ISSN: 0869-2084 (Print) ISSN: 2412-1320 (Online)

Купить
Аннотация Об авторах Список литературы Ключ. слова

Аннотация

Цель — проанализировать метод количественного определения кольцевой ковалентно-замкнутой ДНК ВГВ в пункционных биоптатах печени и оценить его значимость при идентификации HBsAg-негативного вирусного гепатита В. В работе были использованы образцы биопсийного материала ткани печени 128 больных, проживающих на территории Санкт-Петербурга, в различных регионах РФ, а также в Республике Узбекистан. Для количественного анализа кольцевой ковалентно-замкнутой ДНК ВГВ в биопсийном материале на базе методики выявления ккз ДНК ВГВ Pollicino T. и др. был разработан метод, основанный на ПЦР с детекцией в режиме реального времени с использованием TaqMan зондов для целевого фрагмента и для эндогенного референсного гена. При количественной оценке ккз ДНК ВГВ в ткани печени 18 больных ХВГВ умеренной активности с положительным результатом ПЦР ДНК ВГВ и 16 неактивных носителей HBsAg, содержание ккз ДНК ВГВ достоверно отличалось между группами (p<0,034) и в пересчете на 1 копию гена β-глобина у больных ХВГВ умеренной активности составило 1,71±1,32 копий/кл, а у неактивных носителей HBsAg 0,15±0,14 копий/кл. В группе больных с выраженным фиброзом и циррозом печени количество ккз ДНК ВГВ в ткани печени у пациентов с ХВГВ составило в среднем 2,5±0,4 копии/клетку, у пациентов с ХВГВ + Д в среднем 0,7±0,25 копий/клетку, у пациентов с коинфекцией ВГС + ВГВ 0,45±0,07 копий/клетку, у пациентов с предварительным диагнозом ХВГС в среднем 0,12±0,04 копий/клетку, у пациентов с криптогенным гепатитом 0,2±0,05 копии/клетку. Показано значимое отличие между группой больных ХВГВ с выраженным фиброзом и циррозом печени со всеми группами пациентов, кроме группы из 18 больных ХВГВ умеренной активности. Значения t-критерия Стьюдента при сравнении с остальными группами составили соответственно: для пациентов с предварительным диагнозом ХВГС t=5,92 p<0,05 f = 19, пациентов с криптогенным гепатитом t=5,71 p<0,05 f = 18, с «неактивным носительством HBsAg» t=5,55 p<0,05 f = 29, с коинфекциями ВГС + ВГВ t=5,05 p<0,05 f = 15 и ХВГВ + Д t=3,82 p<0,05 f = 17. Метод количественной оценки кольцевой ковалентно-замкнутой ДНК ВГВ в пункционных биоптатах печени позволяет идентифицировать HBsAg-негативную форму хронического вирусного гепатита В, а также отражает активность репликации вируса, что, в свою очередь, дает возможность предполагать дальнейшее прогрессирование заболевания и оценивать эффективности антивирусной терапии.