МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГИСТАТИНОВ СЛЮНЫ

Аннотация

Гистатины являются наиболее значимыми антимикробными пептидами (АМП) слюны человека, их насчитывается 12 видов. Молекулы гистатинов содержат относительно высокий процент остатков гистидина и тирозина. Это свойство позволяет применить известную из органической химии реакцию Паули для определения уровня связанных с белком остатков гистидина и тирозина (СГТ), что, по сути, характеризует суммарное содержание всех гистатинов в слюне. Цель работы – сравнение этого показателя с антимикробной активностью фракции АМП слюны при воспалительных заболеваниях верхних дыхательных путей (ВЗВДП). Обследованы 28 человек с диагнозами: хронический фарингит (n=11), хронический тонзиллит (n=7), назофарингит (n=5), поллиноз (n=5). Степень выраженности клинических признаков воспаления оценивали в баллах. Алгоритм проведения анализа СГТ включал следующие стадии: замораживание-оттаивание слюны; удаление микрочастиц осаждением; получение фракции ниже 100 кДа; диализ – удаление свободных аминокислот; проведение реакции Паули. Антимикробную активность цельной слюны и её низкомолекулярных фракций оценивали в отношении культуры Candida albicans методом спектрофотометрии. Анализ осадков слюны на наличие кокковой микробиоты проводили методом ПЦР. Впервые метод Паули адаптирован для оценки уровней гистатинов слюны у пациентов с ВЗВДП. Уровень гистатинов (СГТ) коррелировал с выраженностью воспалительного процесса (r=0,975) и активностью низкомолекулярной фракции слюны (АМП) (r=0,824), содержащей АМП. Соотношение АМП/СГТ, т. е. противомикробная активность, приходящаяся на «единицу» гистатинов, снижалась по мере роста выраженности клинических признаков воспаления (r=-0,944). Значительных различий по частоте встречаемости кокковой микробиоты в зависимости от диагноза не выявлено. Частота встречаемости S. aureus не связана ни с выраженностью воспалительного процесса (r=0,118), ни с концентрацией гистатинов (СГТ) в слюне (r=0,318). Частоты встречаемости S. pyogenes и S. pneumoniae находились в обратной взаимосвязи по отношению к данным показателям (r=-0,627/-0,614) и (r=-0,827/-0,864). Возможно при острых формах течения ВЗВДП рост S. pyogenes и S. pneumoniae сдерживается за счет высоких уровней гистатинов.

Об авторах

Список литературы

Khurshid Z., Naseem M., Sheikh Z., Najeeb S. , Shahab S., Zafar M.S. Oral antimicrobial peptides: Types and role in the oral cavity. Saudi Pharm J. 2016; 24(5): 515-24.

Khurshid Z., Najeeb S., Mali M., Moin S. F., Raza S.Q., Zohaib S., et al. Histatin peptides: Pharmacological functions and their applications in dentistry. Saudi Pharm J. 2017; 25(1): 25-31.

Sun X., Salih E., Oppenheim F.G., Helmerhorst E.J. Kinetics of histatin proteolysis in whole saliva and the effect on bioactive domains with metal-binding, antifungal, and wound-healing properties. FASEB J. 2009; 23(8): 2691-701.

Tsai H., Bobek L.A. Human salivary histatins; promising anti-fungial therapeutic agents. Crit. Rev. Oral Biol. Med. 1998; 9(4): 480-97.

Ganeeva L.A., Zaynullin L.I., Abramova Z.I., Tenisheva N.K. Biokhimiya.[Praktikum: Meditsinskaya biokhimiya. Uchebnoe posobie], Kazan`: ISB; 2015. (in Russian)

Арзуманян В.Г., Мальбахова Е.Т., Фошина Е.П., Артемьева Т.А., Бутовченко Л.М., Вартанова Н.О. Способ определения совокупной активности антимикробных пептидов как маркера состояния местного иммунитета различных эпителиальных тканей. Патент РФ № 2602298; 2015.

Математические методы обработки данных (он-лайн расчёт). Доступно на: https://www.psychol-ok.ru/lib/statistics.html

Campese M., Sun X., Bosch J.A., Oppenheim F.G., Helmerhorst E.J. Concentration and Fate of Histatins and Acidic Proline-rich Proteins in the Oral Environment. Arch. Oral Biol. 2009; 54(4): 345-53.

Арзуманян В.Г., Вартанова Н.О., Мальчевская М.А., Ерофеева Т.В., Фошина Е.П., Магаршак О.О., и др. Микробиота ротоглотки при респираторных инфекционных воспалительных заболеваниях. Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы. 2017; 7(2): 22-8.

Арзуманян В.Г., Фошина Е.П., Вартанова Н.О., Мальчевская М.А., Ерофеева Т.В. Ак тивность фракции антимикробных пептидов слюны при респираторных инфекционных воспалительных. Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы. 2018; 8(1): 33-41.

Pateel D.G.S. , Gunjal S., Math S.Y., Murugeshappa D.G., Nair S.M. Correlation of Salivary Statherin and Calcium Levels with Dental Calculus Formation: A Preliminary Study. Hindawi International Journal of Dentistry. 2017. Article ID 2857629. Available at : https://www.hindawi.com/journals/ijd/2017/2857629/

Giusti L., Sernissi F., Donadio E., Ciregia F., Giacomelli C., Giannaccini G. et al. Salivary psoriasin (S100A7) correlates with diffusion capacity of carbon monoxide in a large cohort of systemic sclerosis patients. Journal of Translational Medicine . 2016; 14: 262.

Jenzano J. W., Hogan S.L., Lundblad R. L. Factors Influencing Measurement of Human Salivary Lysozyme in Lysoplate and Turbidimetric Assays. Journal of clinical microbiology. 1986; 24(6): 963-7.

Jonsson R., Cuida M., Brun J., Tynning T.R. Tynning Roland. Calprotectin levels in oral fluids: the importance of collection. Wiley Online Libruary. 1995; 103(1):8-10.

Berlutti F., Pilloni A., Pietropaoli M., Polimeni A., Valenti P. Lacroferrin and oral diseases: current status and perspective in periodontitis. Annali di Stomatologia. 2011; 2(3-4): 10-8.

Yang Z.-M., Chen L.-H., Zhang M., Lin J., Zhang J. , Chen W.-W., et al. Age Differences of Salivary Alpha-Amylase Levels of Basal and Acute Responses to Citric Acid Stimulation Between Chinese Children and Adults. Front Physiol. 2015; 6: 340.

The UniProt Knowledgebase (UniProtKB) is the central hub for the collection of functional information on proteins https://www.uniprot.org/uniprot/

Ключевые слова