ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТОКСИГЕННОСТИ У CORYNEBACTERIUM DIPHTHERIAE В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ ДИФТЕРИЙНОЙ ИНФЕКЦИИ В СОВРЕМЕННЫХ УСЛОВИЯХ

Аннотация

Цель — проследить в историческом аспекте совершенствование постановки пробы на токсигенность у C. diphtheriае и C. ulcerans, определить особенности её проведения в алгоритме лабораторной диагностики дифтерийной инфекции в России на современном этапе.
Материал и методы. Отработку условий постановки пробы на токсигенность проводили с 9 токсигенными штаммами C. diphtheriае и C. ulcerans. Постановку пробы на токсигенность осуществляли с колониями, выращенными на кровяной теллуритовой среде (КТА) и Коринебакагаре (КБА) (ФБУН ГНЦ ПМБ (Оболенск, Россия). Исследование проведено на основании МУ 4.2.3065-13. Пробу на токсигенность проводили с использованием Коринетоксагара (ФБУН ГНЦПМБ (Оболенск, Россия) и питательной среды ОТДМ (АО «НПО «Микроген» (Россия).
Результаты. Исследования показали 100% эффективность постановки пробы на токсигенность при изучении колоний коринебактерий с КТА и с КБА, при использовании Коринетоксагара и среды ОТДМ. Обоснована необходимость добавления в питательную среду 20% сыворотки крови крупного рогатого скота и ограничения в использовании лошадиной сыворотки. Отработано количество вносимой питательной среды и сыворотки в зависимости от диаметра чашки Петри.
Заключение. Проведённые исследования показали, что для постановки пробы с полосками можно использовать фильтровальную бумагу марок ФБ или ФОБ III. Уточнены расстояния между «бляшками» бактериальных культур, полосками или дисками с антитоксином. Отражены особенности постановки пробы на токсигенность со штаммами C. ulcerans. Полученные результаты включены в МУК 4.2.3852-23 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции».

Annotation

The aim is to trace in historical aspect the improvement of testing for toxicity in C. diphtheriae and C. ulcerans, to determine the peculiarities of its implementation in the algorithm for laboratory diagnostics of diphtheria infection in Russia at the current stage.
Material and methods. Testing of the conditions for toxigenicity was carried out with 9 toxigenic strains of C. diphtheriae and C. ulcerans. The toxigenicity test was performed with colonies grown on Tellurite agar based on GRM-agar (FBIS SRC AMB, Obolensk) and Corynebacagar (CBA) (FBIS SRC AMB, Obolensk). The study was conducted based on MU 4.2.3065-13. The toxigenicity test was performed using Corinetoxagar ((FBIS SRC AMB, Obolensk) and diphtheria microbe detection medium(OTDM) (FSUE NPO Microgen, Russia).
Results. Studies have shown 100% efficacy of testing for toxigenicity in corynebacterial colonies with Tellurite agar and CBA, as well as in the use of Corynetoxagar and diphtheria microbe detection medium. The need to add 20% bovine serum to the culture medium and limit the use of equine serum is justified. The amount of introduced culture medium and serum was worked out depending on the diameter of the Petri dish.
Conclusion. Experiments have shown that filter paper of grades FB or FOB III can be used to place a sample with strips. The distances between the bacterial cultures, strips or disks with antitoxin have been clarified. Features of testing for toxigenicity with C. ulcerans strains are reflected. The results obtained are included in MUC 4.2.3852-23 «Laboratory Diagnostics of Diphtheria Infection».
Key words: Corynebacterium diphtheriaе; bacteriological diagnostics; diphtheria toxin; toxigenicity test; antitoxin.

Об авторах

Список литературы

1.Barksdale L. Corynebacterium diphtheriae and its relatives. Bacteriol. Reviews. 1970; 34(4): 378-422.
2.Favorova L.A., Astafieva N.V., Korzhenkova M.P. Diphtheria [Difteriya]. Moscow: Meditsina; 1988. (in Russian)
3.Kharseeva G. G., Alutina E. L., Gasretova T. D., Dyatlov I. A., Chepusova A. V., Mironov A. Yu. et al. Diphtheria: microbiological and immunological aspects [Difteriya: mikrobiologicheskie I immunologicheskie aspekty]. Moscow: Prakticheskaya meditsina; 2014. ISBN 978-5-98811-277-8. (in Russian)
4.Kharseeva G. G., Tyukavkina S. Yu., Mironov A. Yu. Diphtheria: characteristics of the pathogen and laboratory diagnostics Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika. 2020; 65(11): 699-706. DOI: 10.18821/0869-2084-2020-65-11-699-706. (in Russian)
5.Petrie G.F., Steabben D. Specific identification of the chief pathogenic Clostridia of gas gangrene. British medical journal. 1943; 27:377-9.
6.Elek S.D. The recognition of toxicogenic bacterial strains in vitro. British medical journal. 1948; 13: 493-6.
7.Ouchterlony O. In vitro method for testing the toxin-producing capacity of diphtheria bacteria. Acta Pathol. Microbiol. Scand. 1948; 25(1-2):186-91.
8.Elek S.D. The plate virulence test for diphtheria. J. Clin. Patholog. 1949; 2: 250-8.
9.Ouchterlony O. In vitro method for testing the toxin-producing capacity of diphtheria bacteria. Acta Pathol. Microbiol. Scand. 1949; 26(4):516-24.
10.Colman G., Cookson B. Routine screening for Corynebacterium diphtheriae. Lancet. 1990; 336:1199.
11.Brooks R., Joynson D.H.M. Bacteriological diagnosis of diphtheria. J. Clin. Patholog. 1990; 43(7):576-80.
12.Dyatlov I. A., Mironov A. Yu., Shepelin A. P., Aleshkin V. A. State and trends in the development of clinical and sanitary microbiology in the Russian Federation and the problem of import substitution. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika. 2015; 60(8): 61-5. (in Russian)

Ключевые слова