Аннотация
Оптимизирован способ детекции и генотипирования патогенных лептоспир в биологических образцах, на основе класси-
ческой ПЦР с использованием трёх пар праймеров. При разработке метода использованы образцы, полученные от диких и
синантропных мелких грызунов, собранных на территории Санкт-Петербурга. Согласно разработанному методу из клини-
ческого материала экстрагируют тотальную ДНК, далее с помощью амплификации по фрагменту гена lipL32 определяют
наличие или отсутствие ДНК патогенных лептоспир. Образцы, содержащие ДНК патогенных лептоспир, амплифицируют
последовательно по двум фрагментами генов rpoB и secY. Регистрируют полученные результаты посредством электрофо-
реза в агарозном геле с последующей детекцией на трансиллюминаторе. Полученные фрагменты секвенируют по Сэнгеру.
Оптимизированный способ направлен на усовершенствование и расширение арсенала способов, предназначенных для выявле-
ния и генотипирования различных видов патогенных лептоспир в целях улучшения диагностики и профилактики заболевания
Annotation
The method for detection and genotyping of pathogenic leptospires in biological samples has been optimized, based on classical PCR
using three pairs of primers. When developing the method, samples obtained from wild and synanthropic small rodents collected in
St. Petersburg were used. According to the method we developed, total DNA is extracted from clinical material, then the presence or
absence of pathogenic Leptospira DNA is determined using amplification using a fragment of the lipL32 gene. Two fragments of the
rpoB and secY genes amplify samples containing DNA of pathogenic Leptospira sequentially. The results obtained are recorded by
electrophoresis in an agarose gel, followed by detection on a transilluminator. The resulting fragments are sequenced using Sanger.
The optimized method is aimed at improving and expanding the range of methods designed to identify and genotype various types of
pathogenic leptospira in order to improve the diagnosis and prevention of the disease.
Key words: Leptospira; leptospirosis; genotyping of pathogenic leptospira; diagnostic method for leptospirosis
Список литературы
Л И Т Е РАТ У РА ( П П . 1 , 3 , 5 — 2 1 , С М . R E F E RENC
E S )
2. Стоянова Н.А., Токаревич Н.К., Ваганова А.Н. Лептоспирозы: по-
собие для врачей. СПб: НИИЭМ им. Пастера; 2010.
4. Транквилевский Д.В., Киселева Е.Ю., Корзун В.М., Бренёва Н.В.,
Вержуцкая Ю.А., Зарва И.Д. и др. Эпизоотолого-эпидемиологиче-
ская ситуация по лептоспирозам в Российской Федерации в период
с 2013 по 2022 г. и прогноз на 2023 г. Проблемы особо опасных ин-
фекций. 2023; (3): 43-50. DOI: 10.21055/0370-1069-2023-3-43-50.
15. Баимова Р.Р., Останкова Ю.В., Блинова О.В., Стоянова Н.А., Тока-
ревич Н.К. Молекулярно-генетическая характеристика коллекци-
онных штаммов LEPTOSPIRA spp. Санкт-Петербургского инсти-
тута Пастера на основе данных секвенирования гена 16S рРНК.
Инфекция и иммунитет. 2023; (6): 1040-8. DOI: 10.15789/2220-
7619-MAG-17028.
R E F E R E NC E S
1. Her R., Crespin L., Etougbétché J., Groud K., Gnolonfoun M.,
Chapron A. et al. Seroprevalence and renal carriage of pathogenic
Leptospira in livestock in Cotonou, Benin. Veterinary medicine and
science. 2024; 10(3): e1430. DOI: 10.1002/vms3.1430.
2. Stoyanova N.A., Tokarevich N.K., Vaganova A.N. Leptospirosis:
a manual for doctors. St. Petersburg: NIIEM im. Pastera; 2010. (in
Russian)
3. Pinto G.V., Senthilkumar K., Rai P., Kabekkodu S.P., Karunasagar
I., Kumar B.K. Current methods for the diagnosis of leptospirosis:
Issues and challenges. Journal of microbiological methods. 2022;
195: 106438. DOI: 10.1016/j.mimet.2022.106438.
4. Trankvilevsky D.V., Kiseleva E.Yu., Korzun V.M., Breneva N.V., Verzhutskaya
Yu.A., Zarva I.D. et al. Epizootiological and epidemiological situation
on leptospirosis in the Russian Federation over the period of 2013–2022
and the forecast for 2023. Problemy osobo opasnykh infektsiy. 2023; (3):
43-50. DOI: 10.21055/0370-1069-2023-3-43-50. (in Russian)
5. Alexopoulou C., Proklou A., Kokkini S., Raissaki M., Konstantinou
I., Kondili E. A fatal case of presumptive diagnosis of Leptospirosis
involving the Central Nervous System. Healthcare (Basel). 2024;
12(5): 568. DOI: 10.3390/healthcare12050568.
6. Verma V., Goyal M., Kala D., Gupta S., Kumar D., Kaushal A. Recent
advances in the diagnosis of leptospirosis. Frontiers in bioscience
(Landmark ed.). 2020; 25(9): 1655-81. DOI: 10.2741/4872.
7. Levett P.N. Leptospirosis. Clinical microbiology reviews. 2001; 14(2):
296-326. DOI: 10.1128/CMR.14.2.296-326.2001.
8. Ca Ferreira L., de Fa Ferreira Filho L., V Cosate M.R., Sakamoto
T. Genetic structure and diversity of the rfb locus of pathogenic
species of the genus Leptospira. Life science alliance. 2024; 7(6):
e202302478. DOI: 10.26508/lsa.202302478.
9. Sohm C., Willixhofer D., Fasching E., Waldner K., Deitzer N., Steiner
J. et al. First isolation and genotyping of pathogenic Leptospira spp.
from Austria. Scientific reports. 2024; 14(1): 4467. DOI: 10.1038/
s41598-024-53775-w.
10. Vincent A.T., Schiettekatte O., Goarant C., Neela V. K., Bernet E.,
Thibeaux R. et al. Revisiting the taxonomy and evolution of pathogenicity
of the genus Leptospira through the prism of genomics. PLoS
neglected tropical diseases. 2019; 13(5): e0007270. DOI: 10.1371/
journal.pntd.0007270.
11. Bourhy P., Herrmann Storck C., Theodose R., Olive C., Nicolas
M., Hochedez P. et al. Serovar diversity of pathogenic Leptospira
circulating in the French West Indies. PLoS neglected tropical
diseases. 2013; 7(3): e2114. DOI: 10.1371/journal.pntd.0002114.
12. Kakita T., Kuba Y., Kyan H., Okano S., Morita M., Koizumi N.
Molecular and serological epidemiology of Leptospira infection in
cats in Okinawa Island, Japan. Scientific reports. 2021; 11(1): 10365.
DOI: 10.1038/s41598-021-89872-3.
13. Ružić-Sabljić E., Podgoršek D., Strašek Smrdel K., Celar Šturm, A.,
Logar M., Pavlović A. et al. First report on Leptospira species isolated
from patients in Slovenia. Microorganisms. 2023; 11(11): 2739.
DOI: 10.3390/microorganisms11112739.
14. Di Azevedo M.I.N., Lilenbaum W. An overview on the molecular
diagnosis of animal leptospirosis. Letters in applied microbiology.
2021; 72(5): 496-508. DOI: 10.1111/lam.13442.
15. Baimova R.R., Ostankova Yu.V., Blinova O.V., Stoyanova N.A.,
Tokarevich N.K. Molecular and genetic characterization of LEPTOSPIRA
spp. collection strains from the St. Petersburg Pasteur institute
based on 16S rRNA gene sequencing data. Infektsiya i immunitet.
2023; 13: 6. DOI: 10.15789/2220-7619-MAG-17028. (in Russian)
16. Guernier V., Allan K.J., Goarant C. Advances and challenges in
barcoding pathogenic and environmental Leptospira. Parasitology.
2018; 145(5): 595-607. DOI: 10.1017/S0031182017001147.
17. Thibeaux R., Girault D., Bierque E., Soupé-Gilbert M.E., Rettinger
A., Douyère A. et al. Biodiversity of environmental Leptospira: improving
identification and revisiting the diagnosis. Frontiers in microbiology.
2018; 9: 816. DOI: 10.3389/fmicb.2018.00816.
18. Victoria B., Ahmed A., Zuerner R. L., Ahmed N., Bulach D. M.,
Quinteiro J., et.al. Conservation of the S10-spc-alpha locus within
otherwise highly plastic genomes provides phylogenetic insight into
the genus Leptospira. PloS One. 2008; 3(7): e2752. DOI: 10.1371/
journal.pone.0002752.
19. Grillová L., Angermeier H., Levy M., Giard M., Lastère S., Picardeau
M. Circulating genotypes of Leptospira in French Polynesia: an
9-year molecular epidemiology surveillance follow-up study. PLoS
neglected tropical diseases. 2020; 14(9): e0008662. DOI: 10.1371/
journal.pntd.0008662.
20. Medeiros L.D.S., Braga Domingos S.C., Azevedo M.I.N.D., Peruquetti
R.C., de Albuquerque N.F., D’Andrea P.S. et. al. Small mammals
as carriers/hosts of Leptospira spp. in the Western Amazon forest.
Frontiers in veterinary science. 2020; 7: 569004. DOI: 10.3389/
fvets.2020.569004.
21. Ma X. J., Gong X. Q., Xiao X., Liu J. W., Han H. J., Qin X. R. et al.
Detection of Leptospira interrogans in hedgehogs from Central China.
Vector borne and zoonotic diseases (Larchmont, N.Y.) 2020; 20(6):
427-31. DOI: 10.1089/vbz.2019.2544.
22. Chaiwattanarungruengpaisan S., Thepapichaikul W., Paungpin W.,
Ketchim K., Suwanpakdee S., Thongdee M. Potentially pathogenic
Leptospira in the environment of an elephant camp in Thailand.
Tropical medicine and infectious disease. 2020; 5(4): 183. DOI:
10.3390/tropicalmed5040183.
23. Guernier V., Richard V., Nhan T., Rouault E., Tessier A., Musso D.
Leptospira diversity in animals and humans in Tahiti, French Polynesia.
PLoS neglected tropical diseases. 2017; 11(6): e0005676. DOI:
10.1371/journal.pntd.0005676.
24. Di Azevedo M.I.N., Lilenbaum W. An overview on the molecular
diagnosis of animal leptospirosis. Letters in Applied Microbiology.
2021; 72(5): 496-508. DOI: 10.1111/lam.13442.