ОСОБЕННОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ СРЕДЫ ПИЗУ В БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКЕ ДИФТЕРИИ В СОВРЕМЕННЫХ УСЛОВИЯХ

Аннотация

Цель. Для разработки адаптированного к современным условиям алгоритма лабораторной диагностики дифтерийной инфекции и подготовки нового нормативного документа проведены исследования по постановке пробы Пизу с 9 токсигенными штаммами C. diphtheriае и C. ulcerans.
Материал и методы. Постановку пробы Пизу осуществляли с колониями, выращенными на кровяной теллуритовой среде (КТА) на основе ГРМ-агара (ФБУН ГНЦ ПМБ, Оболенск) и Коринебакагаре (КБА) (ФБУН ГНЦ ПМБ, Оболенск). Использована среда Пизу согласно МУ 4.2.3065-13 на основе АГВ среды (ФБУН ГНЦПМБ, Оболенск) с добавлением 10 мл сыворотки крупного рогатого скота (НПО «Лейтран», Москва), среда Пизу (ФБУН ГНЦПМБ, Оболенск), среда Пизу (НПО «Питательные среды», Микроген), среда Пизу «ДС-ДИФ-КОРИНЕ» (НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород). Всего проведено 648 постановок.
Результаты. При постановке пробы на всех четырёх видах коммерческих сред Пизу с 0,5-3 колониями C. diphtheriae, выросшими в течение 24 часов на КТА и КБА, положительный результат отсутствовал, при постановке с 4-7 колониями отмечен не стабильный результат, с 8 колониями — стабильный положительный результат. Положительный результат пробы на лабораторно-приготовленной среде Пизу отмечен с 0,5 колониями. При постановке пробы Пизу с колониями, выросшими на 10% сывороточном агаре, стабильный положительный результат отмечен с 0,5 колоний. Заключение. Для повышения диагностической эффективности выявления возбудителя дифтерии в адаптированном алгоритме лабораторной диагностики (МУК 4.2.3852-23 «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции») постановка пробы Пизу для оценки цистиназной активности проводится с бактериальной культурой, выросшей на 10% сывороточном агаре.

Annotation

Aim. In order to develop an algorithm adapted to the current conditions for laboratory diagnostics of diphtheria infection and to prepare a new regulatory document, we conducted experiments on Pizu medium with 9 toxigenic strains of C. diphtheriae and C. ulcerans.
Material and methods. The Pizu test was set with colonies grown on Tellurite agar based on GRM-agar (FBIS SRC AMB, Obolensk) and Corynebacagar (CBA) (FBIS SRC AMB, Obolensk). The study used Pisa medium according to MU 4.2.3065-13 based on AGV medium (FBIS SRC AMB, Obolensk) with the addition of 10 ml bovine serum (Leitran, Moscow), Pizu medium (FBIS SRC AMB, Obolensk), Pizu medium (Microgene), Pizu medium «DS-DIF-KORINE» (Diagnostics, N. Novgorod). A total of 648 productions were carried out.
Results. It was shown that when testing all four types of commercial of Pizu medium with 0.5-3 colonies of C. diphtheriae, which grew within 24 hours on Tellurite agar and CBA, there was no positive result, when testing with 4-7 colonies — non stable result and with 8 colonies there was a stable positive result. While the positive result of the test on the laboratory-prepared medium of Pizu was noted with 0.5 colonies. When testing Pizu medium with colonies grown on 10% serum agar, a stable positive result was observed with colony 0.5.
Conclusion. For increase the diagnostic efficiency of detecting the C. diphtheriae in an adapted algorithm for laboratory diagnosis (4.2.3852-23 «Laboratory diagnosis of diphtheria infection») the Pizu test for assessing cystinase activity is performed with a bacteriological culture that grew by 10% serum agar.
Key words: Corynebacterium diphtheriaе; bacteriological diagnostics; Pizu test; diphtheria infection; colonies.

Об авторах

Список литературы

1.Barksdale L. Corynebacterium diphtheriae and its relatives. Bacteriol. Reviews. 1970; 34(4): 378-422.
2.Brooks R., Joynson D.H.M. Bacteriological diagnosis of diphtheria. J. Clin Pathol. 1990; 43:576-80.
3.Colman G., Weaver E., Efstratiou A. Screening test for pathogenic corynebaсteria. J. Clin. Patholog. 1992; 45: 46-8.
4.Kharseeva G.G., Alutina E.L., Gasretova T.D. ., Dyatlov I.A., Chepusova A.V., Mironov A.Yu. et al. Diphtheria: microbiological and immunological aspects. Moscow: Prakticheskaya meditsina; 2014. — ISBN 978-5-98811-277-8. (in Russian)
5.Favorova L.A., Astafieva N.V., Korzhenkova M.P. Diphtheria. Moscow: Meditsina; 1988. (in Russian)
6.Fel`dman J.M., Makhaneva L.G., Labah A.I. A new modification of the Pizu medium based on the AGV medium for rapid identification of Corynebacteriun diphtheriae. Laboratornoe delo. 1989; 4:69-70. (in Russian)
7.Fel`dman J.M., Melnyk N.S. Method of accelerated identification of Corynebacterium diphtheriae. Zhurnal mikrobiologii, epigemiologii I immunobiologii. 1982; 3: 18-20. (in Russian)
8.Gabrielyan S.A. An accelerated method for detecting pathogenic corynebacteria. Infektsiya I immunitet. 2013; 3(4): 347-50. (in Russian)
9.Kharseeva, G.G., Tyukavkina S.Yu., Mironov A.Yu. Diphtheria: pathogen characteristics and laboratory diagnostics Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika. 2020; 65(11): 699-706. DOI: 10.18821/0869-2084-2020-65-11-699-706. (in Russian)
10.Shepelin A.P., Domotenko L.V., Dyatlov I.A., Mironov A.Yu., Aleshkin V.A. Modern approaches to the problem of import substitution in the field of production of nutrient media Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika. 2015; 60(6): 63-5. (in Russian)
11.Moore M.S., Parson E.I. A study of a modified Tinsdale’s medium for the primary isolation of Corynebacterium diphtheriae. J. Infectious Diseases. 1958; 102 (1): 88-93.
12.Methods in Microbiology. Bergen T., Norris J.R., eds. London: Academic Press, 1978. ISBN 0-12-521512-6.
13.Dyatlov I.A., Mironov A.Yu., Shepelin A.P., Alyoshkin V.A. The state and trends in the development of clinical and sanitary microbiology in the Russian Federation and the problem of import substitution Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika. 2015; 60(8): 61-5. (in Russian)
14.Tinsdale G.F. A new medium for the isolation and identification of C. diphtheriae based on the production of hydrogen sulfide. J. Pathol. Bacteriology. 1947; 59:461-6.
15.Wilson A.P.R., Ridgway G.L., Gruneberg R.N., Efstratiou A., Colman G., Cookson B. Routine screening for Corynebacterium diphtheriae. Lancet. 1990; 336:1199.

Ключевые слова