Аннотация
Цель работы — сравнительное определение жизнеспособности сперматозоидов по состоянию проницаемости мембран для эозина (ЭО) и пропидия йодида (PI) и сопоставление результатов, полученных методами световой и флуоресцентной микроскопии. Сравнение данных световой микроскопии с окраской ЭО и флуоресцентной микроскопии с окраской PI показало, что процентное содержание сперматозоидов, выделенных из эякулятов 28 фертильных мужчин, окрашенных ЭО, было достоверно выше (34,8 ± 3,2), чем процентное содержание сперматозоидов, окрашенных PI (21,1 ± 4,0). После инкубации сперматозоидов при комнатной температуре в течение 24 ч процент нежизнеспособных клеток, окрашенных ЭО, был также выше, чем при окрашивании PI- соответственно 44,5 ± 3,3 и 34,7 ± 3,6. Изучение жизнеспособности сперматозоидов при повреждающем действии на мембрану клетки оксидативного стресса, создаваемого 4-часовой инкубацией с 200 мкМ перекиси водорода (H2O2), показало, что при окрашивании сперматозоидов PI выявляется существенно более высокий процент поврежденных клеток, а ЭО в этих случаях менее пригоден для выявления жизнеспособности сперматозоидов (73,6± 5,8 против 51,7± 6,4). Проведенный эксперимент показывает, что в случае определенных воздействий на сперматозоиды (например, воздействие оксидативного стресса) световая микроскопия недостаточно адекватно отражает степень повреждения мембран сперматозоидов, а при флуоресцентной микроскопии выявляется более высокий процент сперматозоидов с поврежденной мембраной.
Об авторах
Плосконос Мария ВячеславовнаГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздрава России 414000, Астрахань, Россия канд. биол. наук, проф., доцент каф. химии ploskonoz@mail.ru
Список литературы
WHO laboratory manual for the examination of human sperm and semen-cervical mucus interaction. 4th ed. Cambridge: University Press; 1999.
Курило Л.Ф., ред. Руководство ВОЗ по лабораторному исследованию эякулята человека и взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью. 4-е изд. М.: «МедПресс»; 2001.
Долгов В.В., Луговская С.А., Фанченко Н.Д., Миронова И.И., Назарова Е.К., Ракова Н.Г. и др. Лабораторная диагностика мужского бесплодия. М.: Кафедра КЛД; 2006.
Tarozzi N., Bizzaro D., Flamigni C., Borini A. Clinical relevance of sperm DNA damage. Reprod. Biomed 2007; 14 (6): 746-57.
Falzone N., Huyser C., Franken D.R. Comprason between propidium iodide and 7-amino-actinomicyn-D for viability assessment during flow cytometric analyses of the human sperm acrosome. Andrologia. 2010; 42 (1): 20-6.
Комарова М.В. Характеристика эякулята в оценке репродуктивных возможностей человека: Автореф. дис. канд. биол. наук. Уфа; 2000.
Шеина Ю.И., Зайцева Т.А., Махалова Н.А., Новосельцева А.В., Маркова Е.В., Светлаков А.В. Анализ фрагментации ДНК в сперматозоидах с помощью окраски акридиновым оранжевым у пациентов с бесплодием. Проблемы репродукции. 2012; 5: 74-9.
Darzynkiewicz Z., Juan G., Li X., Gorczyca W., Murakami T., Traganos F. Cytometry in cell necrobiology: analysis of apoptosis and accidental cell death (necrosis). Cytometry. 1997; 27 (1): 1-20.
Glander H.-J., Schaller J. Binding of annexin V to plasma membranes of human spermatozoa: a rapid assay for detection of membrane changes after cryostorage. Mol. Hum. Reprod. 1999; 5 (2): 109-15.
Плосконос М.В. Методы определения апоптоза сперматозоидов (Обзор литературы). Клиническая лабораторная диагностика. 2013; 4: 3-8.
Данченко Е.О. Лабораторные методы оценки апоптоза и некроза. Медицинская панорама (Лабораторная медицина). 1999; 3: 18-9.