Научно-практический журнал Клиническая лабораторная диагностика

Применение технологии на основе зондов по типу «молекулярных маячков» и ПЦР в реальном времени для выявления устойчивости к изониазиду, рифампицину, фторхинолонам на культурах M. tuberculosis

Кудряшов А.В.Чередниченко А.Г.Евдокимова Л.С.Альховик О.И.Гусельникова Е.П.Гордеева Е.И.Шахмурадова А.И.Иванов М.К.Шварц Я.Ш.Ставицкая Н.В.

Doi: 10.51620/0869-2084-2025-70-6-447-454 EDN: KCFSRF ISSN: 0869-2084 (Print) ISSN: 2412-1320 (Online)

Купить
Аннотация Об авторах Список литературы Ключ. слова

Аннотация

Введение. Своевременное и точное определение устойчивости к противотуберкулёзным препаратам является критически значимым при терапии туберкулёза. Молекулярные методы позволяют выявить мутации в генах устойчивости и являются быстрыми и точными методами.
Целью данного исследования является апробация на культуральном материале новой технологии, основанной на ПЦР в реальном времени с последующим снятием кривых плавления, с использованием зондов, построенных по принципу «молекулярных маячков», для определения устойчивости микобактерий туберкулёза к изониазиду, рифампицину и фторхинолонам.
Результаты. Исследовано 325 культур M. tuberculosis с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ), установленной фенотипическими методами, а также 10 культур, чувствительных к изониазиду и рифампицину. В качестве метода сравнения применяли секвенирование генов устойчивости к антибиотикам.
Заключение. По сравнению с секвенированием, чувствительность предложенного метода составляет около 99%, а специфичность — 100%. Данный метод позволяет в течение нескольких часов выявить устойчивость культур M.tuberculosis к изониазиду, рифампицину и фторхинолонам.

Annotation

Introduction. Rapid and correct drug-resistance tests are necessary for tuberculosis therapy. Molecular methods are rapid and precise and can help to detect mutations in drug-resistance genes.
The aim of the study was to approbate our technology on M. tuberculosis cultures with different drug-resistance. This method is based on real-time PCR with melt-curve detection using “molecular beacon” fluorescent probes.
Results. 325 M.tuberculosis cultures with multi-drug resistance and 10 isonaizid- and rifampicin-sensitive cultures were tested by our real-time PCR method. Drug-resistant genes were sequenced for all cultures. (It was a reference method).
Conclusion. Our real-time PCR method revealed sensitivity 99% and specificity 100% (comparing to Sanger sequencing as a reference method). Our test can identify resistance to isoniazid rifampicin and fluoroquinolones in M.tuberculosis cultures in several hours.
Key words: tuberculosis; drug-resistance; real-time PCR; isoniazid; rifampicin; fluoroquinolones

Для цитирования:

Кудряшов А.В., Чередниченко А.Г., Евдокимова Л.С., , Гусельникова Е.П., Гордеева Е.И., Шахмурадова А.И., Иванов М.К., Шварц Я.Ш., Ставицкая Н.В. Применение технологии на основе зондов по типу «молекулярных маячков» и ПЦР в реальном времени для выявления устойчивости к изониазиду, рифампицину, фторхинолонам на культурах M. tuberculosis. Клиническая лабораторная диагностика. 2025; 70 (6): 447-454.
DOI: https://doi.org/10.51620/0869-2084-2025-70-6-447-454
EDN: KCFSRF

For citation:

Kudryashov A.V., Cherednichenko A.G., Evdokimova L.S., Schwartz Y.S., , Guselnikova E.P., Gordeeva E.I., Schwartz Y.S., Stavitskaya N.V. Identification of resistanse to isoniazid, rifampicin and flouroquinolones in M.tuberculosis cultures using real-time pcr technology based on “molecular beacons”. Klinicheskaya laboratornaya diagnostika (Russian Clinical Laboratory Diagnostics). 2025; 70 (6): 447-454 (in Russ.).
DOI: https://doi.org/10.51620/0869-2084-2025-70-6-447-454
EDN: KCFSRF