РАЗРАБОТКА УСКОРЕННОЙ МЕТОДИКИ ГЕНОДИАГНОСТИКИ КОКЛЮША И КОКЛЮШЕПОДОБНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ НА ОСНОВЕ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ В МУЛЬТИПЛЕКСНОМ ФОРМАТЕ
ISSN: 0869-2084 (Print) ISSN: 2412-1320 (Online)
Аннотация
Цель работы — разработка ускоренной методики генодиагностики на основе ПЦР-РВ в мультиплексном формате для обнаружения ДНК B. pertussis, B. parapertussis, B. holmesii. В исследовании использовано 104 штамма микроорганизмов, из них: 50 штаммов B. pertussis, 37 — B. parapertussis, 17 — гетерологичных видов микроорганизмов. Оценка аналитической специфичности проведена с использованием ДНК штаммов различных микроорганизмов с концентрацией не менее 109 ГЭ/мл. Для проверки аналитической чувствительности исследованы серии последовательных разведений бактериальных культур типовых контрольных штаммов B. pertussis № 143, B. parapertussis № 38б, B. holmesii DSM 13416 с концентрацией 5х109- 5 мк/мл. В качестве диагностических мишеней выбраны инсерционные последовательности: для B. parapertussis — специфический фрагмент IS1001, для B. holmesii — специфический фрагмент hlIS1001, для B. pertussis — фрагмент IS481. Для разработки методики генодиагностики сконструированы специфические праймеры, которые объединены в единую мультипраймерную смесь, подобран состав реакционной смеси и условия амплификации. Аналитическая чувствительность разработанной методики для выявления возбудителей коклюша и коклюшеподобных заболеваний составила — 5×101 ГЭ/мл. Проверка разработанной методики генодиагностики показала 100% аналитическую специфичность. Разработана ускоренная методика генодиагностики на основе ПЦР-РВ в мультиплексном формате, позволяющая идентифицировать ДНК B. pertussis, B. parapertussis, B. holmesii, что расширяет возможности обследования больных с подозрением на коклюш и коклюшеподобные заболевания с целью повышения лабораторного подтверждения диагноза.