Аннотация
На примере клинического штамма R. sibirica «Баево 105/87» оценена возможность количественного определения риккетсий в клинических образцах от больных сибирским клещевым тифом методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ). Культивирование осуществляли в желточных мешках развивающихся куриных эмбрионов (РКЭ), из которых забирали кусочек желточного мешка или хориона. Исследовано 125 образцов. Для ПЦР-РВ использован набор реагентов «РеалБест ДНК Rickettsia species (комплект 1)». Полученные значения порогового цикла амплификации (Ct) сравнивали с результатами микроскопии препаратов мазков, окрашенных по методу Здродовского, значения которых разбивали на ранги: I ранг — единичные риккетсии в отдельных полях зрения, II ранг — единичные риккетсии в каждом поле зрения, III ранг — от 10 до 25 риккетсий в каждом поле зрения, IV ранг — от 25 до 50 риккетсий в каждом поле зрения. Медианное значение Ct для I ранга составило 17,6 (16,37; 18,58), для II — 16,0 (15,0; 16,41), для III — 15,0 (14,0; 15,1), для IV — 15,0 (13,7; 14,64). Установлена значимая средней силы корреляционная связь между количеством риккетсий в препарате при микроскопии и значением порогового цикла в ПЦР РВ (r=-0, 4849542; p=9.968e-09). При построении ординальной логической регрессии получена модель с помощью, которой по значениям Ct можно определить количество риккетсий в образце. Представляло интерес обнаружение риккетсий в кровеносных сосудах хориона (РКЭ). В 10-ти образцах для исследования забрали желточный мешок и хорион, и параллельно исследовали методом ПЦР-РВ. Применение современных более чувствительных молекулярно-биологических методов позволяет осуществлять количественный анализ ДНК в хорионе, при этом сохраняя объёмы наиболее ценного материала — желточного мешка.
Об авторах
Штрек Сергей ВладимировичФБУН «Омский НИИ природно-очаговых инфекций» Роспотребнадзора; ФГБОУ ВО «Омский государственный медицинский университет» Минздрава РФ 644080, Омск, Россия; 644099, Омск, Россия канд. мед. наук, зав. лаб. зоонозных инфекций отдела ПОБЗ «Омский НИИ природно-очаговых инфекций» studi1990@mail.ru
Список литературы
Рудаков Н.В., Пеньевская Н.А., Кумпан Л.В., Блох А.И., Шпынов С.Н., Транквилевский Д.В., Штрек С.В. Эпидемиологическая ситуация по риккетсиозам группы клещевой пятнистой лихорадки в Российской Федерации в 2012-2021 гг. и прогноз на 2022-2026 гг. Проблемы особо опасных инфекций. 2022; 1: 54-63.
Рудаков Н.В., Шпынов С.Н., Пеньевская Н.А., Блох А.И., Решетникова Т.А., Самойленко И.Е. и др. Особенности эпидемиологической ситуации по клещевым риккетсиозам в Российской Федерации в 2010-2020 гг. и прогноз на 2021 г. Проблемы особо опасных инфекций. 2021; 1: 73-80.
Рудаков Н.В., Ястребов В.К., Рудакова С.А. Трансмиссивные клещевые инфекции в Российской Федерации. Дальневосточный журнал инфекционной патологии. 2015; 27: 6-9.
Рудаков Н.В. Риккетсии и риккетсиозы: руководство для врачей. Омск: Омский научный вестник; 2016.
Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник для студентов медицинских вузов. 3-е изд., исправленное. Воробьёв А.А., Быков А.С., Бойченко М.Н., ред. М.: Медицинское информационное агентство; 2022. ISBN 978-5-9986-0478-2.
Segura F., Pons I., Sanfeliu I., Nogueras M. Shell-vial culture, coupled with real-time PCR, applied to Rickettsia conorii and Rickettsia massiliae-Bar29 detection, improving the diagnosis of the Mediterranean spotted fever. Ticks and Tick-borne Diseases. 2016.
Ammerman N.C., Beier-Sexton M., Azad A.F. Laboratory Maintenance of Rickettsia rickettsii. Current protocols microbiology. 2008; Chapter 3; Unit 3A.5.
Еремеева М.Е., Шпынов С.Н., Токаревич Н.К. Современные подходы к лабораторной диагностике риккетсиозов. Инфекция и иммунитет. 2014; 4(2): 113-34
Brouqui P., Bacellar F., Baranton G., Birtles R. J., Bjoe¨rsdorff A., Blanco J. R. et al. Guidelines for the diagnosis of tick-borne bacterial diseases in Europe. Clinical Microbiology and Infection. 2004; 10(12): 1108-32.
Kissenkötter J., Hansen S., Böhlken-Fascher S., Ademowo O.G., Oyinloye O.E., Bakarey A.S. et al. Development of a pan-rickettsial molecular diagnostic test based on recombinase polymerase amplification assay. Analytical Biochemistry. 2018; 544: 29-33.
Бесхлебова О.В., Гранитов В.М., Дедков В.Г. Лабораторная диагностика клещевых инфекций с природной очаговостью (клещевой риккетсиоз, иксодовый клещевой боррелиоз). Бюллетень медицинской науки. 2017; 8(4): 50-5.
Гафарова М.Т., Бондаренко Е.И., Малый К.Д., Алиева Э.Э., Евстафьев И.Л., Товпинец Н.Н., Малая Н.К., Кубышкин А.В. Распространённость возбудителей трансмиссивных клещевых риккетсиозов на Крымском полуострове. Клиническая лабораторная диагностика. 2022; 67(3): 170-6.
Щучинова Л.Д., Бондаренко Е.И., Ечешева А.В., Швалов А.Н., Злобин В.И. Клещевой риккетсиоз, вызываемый Rickettsia heilongjiangensis, и его лабораторная диагностика в Республике Алтай. Современные проблемы науки и образования. 2020; 4: 143.
Alieva E.E., Bondarenko E.I., Maliy K.D., Gafarova M.T., Shvalov A.N., Verbenets E.A. The role of Rhipicephalus sanguineus ticks parasitizing dogs in the spread of tick-borne rickettsial pathogens in the city of Sevastopol. New microbes and new infections. 2020; 36: 100704
Сильченко Е.В., Ошорова Л.М., Бальжинимаева И.Ц., Бондаренко Е.И., Дашеева Н.А., Балданов Б.В., Сымбелова Т.А. Выявление возбудителей клещевых инфекций с помощью ПЦР-анализа, проводимого в рамках клинических исследований на базе «Республиканской клинической инфекционной больницы», г. Улан-Удэ. Acta Biomedica Scientifica (East Siberian Biomedical Journal). 2018; 4(3): 138-42