Аннотация
Статья посвящена разработке высокоэффективного метода выявления генетического материала риккетсий, основанного на полимеразной цепной реакции в режиме реального времени (ПЦР-РВ) с использованием оригинальных праймеров к наиболее консервативным участкам гена цитратсинтазы (gltA). Аналитическая чувствительность разработанного ПЦР-РВ-теста позволяет выявлять от 80 геном-эквивалентов в анализируемой пробе в течение 3 ч. Высокая специфичность тест-системы экспериментально подтверждена определением нуклеотидных последовательностей амплифицированных фрагментов гена gltA. Апробация ПЦР-РВ-теста проведена на коллекции из 310 клещей видов I. persulcatus, I. pavlovskyi, D. reticulatus. Показано, что разработанный вариант праймеров и зонда позволяет с высокой степенью чувствительности и специфичности выявлять ДНК различных видов риккетсий, распространенных на территории России (R. sibirica, R. raoultii, R. helvetica, R. tarasevichiae). Предлагаемый ПЦР-РВ-тест может быть также использован для выделения фрагмента гена gltA с целью определения нуклеотидной последовательности и последующего генотипирования риккетсий. Использование предложенного метода облегчит задачу мониторинга природных очагов риккетсиозов.
Об авторах
Карташов Михаил ЮрьевичФБУН Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»; Новосибирский государственный университет; Томский государственный университет 630559, Кольцово, Россия kartashov_myu@vector.nsc.ru
Список литературы
Oteo J., Portillo A. Tick-borne rickettsioses in Europe. Ticks Tick. Borne Dis. 2012; 3(5-6): 271-8.
Parola P., Paddock C.D., Socolovschi C., Labruna M.B., Mediannikov O., Kernif T. et al. Update on tick-borne rickettsioses around the world: a geographic approach. Clin. Microbiol. Rev. 2013; 26(4): 657-702.
Perlman S.J., Hunter M.S., Zchori-Fein E. The emerging diversity of Rickettsia. Proc. Biol. Sci. 2006; 273 (1598): 2097-106.
Walker D.H. Rickettsioses of the spotted fever group around the world. J. Dermatol. 1989; 16(3): 169-77.
Brouqui P., Parola P., Fournier P.E., Raoult D. Spotted fever rickettsioses in southern and eastern Europe. FEMS Immunol. Med. Microbiol. 2007; 49(1): 2-12.
Azad A.F., Beard C.B. Rickettsial pathogens and their arthropod vectors. Emerg. Infect. Dis. 1998; 4(2): 179-86.
Тарасевич И.В. Современные представления о риккетсиях. Клиническая микробиология и антимикробная терапия. 2005; 7(2): 119-29.
Шпынов С.Н. Эколого-эпидемиологические и молекулярногенетические аспекты изучения природных очагов риккетсиозов и эрлихиозов в России: Дисс. … докт. мед. наук. Омск; 2004.
Рудаков Н.В., Шпынов С.Н., Ястребов В.К., Самойленко И.Е., Кумпан Л.В., Решетникова Т.А. и др. Основные итоги разработки проблемы риккетсиозов, передающихся иксодовыми клещами в России. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2012; 66(5): 29-33.
Tarasevich I.V., Makarova V.A., Fetisova N.F., Stepanov A.V., Miskarova E.D., Balayeva N. et al. Astrakhan fever, a spotted-fever rickettsiosis. Lancet. 1991; 337(8734): 172-3.