Клиниколабораторная оценка процедуры прямого флуориметрического определения уровня внеклеточной ДНК

Аннотация

Прямой флуориметрический анализ внеклеточной свободной ДНК (внДНК) выглядит как перспективный тест для диагностики и мониторинга онкологических заболеваний. Нами были оценены основные аналитические параметры этого метода, а также его региональные референтные интервалы, межиндивидуальная и внутрииндивидуальная вариабельность. Было установлено, что предел обнаружения метода равен 42,2 нг/мл, а ответ линеен до 1000 нг/мл (R > 0,99). Замораживание/размораживание плазмы не оказывает никакого влияния на результат анализа вплоть до четвертого цикла. Хранение образцов крови перед центрифугированием в течение 8 ч не оказывает существенного влияния на измеряемый уровень внДНК. Хранение образцов плазмы при -20°C в течение месяца также не имеет существенного эффекта. Коэффициенты аналитических внутридневной и междневной вариаций не превышали 7,2%. Уровень внДНК в плазме у здоровых добровольцев составил 305,7 ± 39,5 нг/мл (M ± σ), а в сыворотке - 422,7 ± 86 нг/мл. Индексы индивидуальности были равны 0,47 и 0,29 (плазма и сыворотка крови соответственно). Таким образом, в нашей работе показано, что прямой флуориметрический метод количественного определения внДНК характеризуется приемлемым для клинических исследований уровнем качества измерений, простотой процедуры, не требующей предварительной экстракции, и может стать перспективным протоколом для применения в рутинной лабораторной практике.