Применение времяпролетной масс-спектрометрии с матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией (MALDI-ToF) для идентификации возбудителей сапа и мелиоидоза

Аннотация

Представлены результаты разработанного методологического подхода к идентификации Burkholderia pseudomallei и Burkholderia mallei с использованием прямого масс-спектрометрического профилирования клеточных белков. Оптимизирован протокол пробоподготовки культур возбудителей мелиоидоза и сапа с учетом особенностей соблюдения требований биологической безопасности для работ с ПБА II группы патогенности. Оценена зависимость качества масс-спектров (число индивидуальных пиков и их интенсивность) от среды культивирования микроорганизмов. Получены характеристические масс-спектры коллекционных штаммов B. pseudomallei (5) и B. mallei (5), сформирован набор референсных масс-спектров для идентификационной базы данных S.A.R.A.M.I.S.™ (Anagnostec GmbH.), с использованием которой проводилась идентификация 43 штаммов патогенных буркхольдерий. В результате продемонстрирована возможность достоверного определения таксономической принадлежности исследуемых микроорганизмов до видового уровня. Кластерный анализ полученных масс-спектров общеклеточных белков коллекционных штаммов патогенных буркхольдерий продемонстрировал группирование исследованных штаммов в соответствии с их видовой принадлежностью. Пополненная база масс-спектральных характеристик в дальнейшем позволит проводить экспресс-идентификацию изолятов, подозрительных на принадлежность к возбудителям мелиоидоза и сапа, а также станет основой для разработки схем хемотипирования штаммов буркхольдерий методом масс-спектрометрии.