СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ПЦР-ДИАГНОСТИКИ ЛЕПРЫ ПУТЁМ АМПЛИФИКАЦИИ ВИДОСПЕЦИФИЧНОГО ПОВТОРЯЮЩЕГОСЯ ФРАГМЕНТА ГЕНОМА MYCOBACTERIUM LEPRAE

ISSN: 0869-2084 (Print) ISSN: 2412-1320 (Online)

Посмотреть или загрузить статью

Читать

Аннотация Об авторах Список литературы Ключ. слова

Аннотация

Сохранение высокого уровня заболеваемости лепрой в ряде государств мира, а также активизация трансграничных миграционных потоков повышают актуальность эффективной диагностики данного заболевания и в странах со спорадической заболеваемостью лепрой, к которым относится Российская Федерация. Цель исследования - разработка высокочувствительного ПЦР-теста для обнаружения генетического материала Mycobacterium leprae и сравнение его эффективности с коммерчески доступной тест-системой «Leprosy genesig Standard Kit» (Primerdesign Ltd., Великобритания). Предложенный подход заключался в амплификации участка некодирующего повторяющегося элемента генома M. leprae - RLEP. С использованием референсных образцов ДНК патогенных и условно-патогенных микобактерий показана высокая специфичность проводимого анализа, а его сравнение с ПЦР, ориентированной на обнаружение однокопийных генов M. leprae (rrs, fbp, MntH), продемонстрировало уменьшение порога детекции, выражаемого количеством циклов амплификации, на котором кривая накопления флуоресцентного сигнала превышала базовый уровень. Использование коммерчески доступной тест-системы, основанной на обнаружении однокопийного гена rpoB, обеспечивало 59,4% чувствительность детекции M. leprae в клиническом материале, в то время как применение разработанного подхода повышало этот показатель до 96,8%. Разработанная тест-система для ПЦР-диагностики лепры представлена на государственную регистрацию, после чего её практическое использование позволит решить широкий круг задач по выявлению и подтверждению новых случаев лепры, мониторингу эффективности проводимого лечения, а также эпидемиологическому (в том числе трансграничному) мониторингу распространения данного заболевания.

Об авторах

Дерябин Дмитрий Геннадьевич

ФГБУ «Государственный научный центр дерматовенерологии и косметологии» Минздрава РФ 107076, Москва, Россия д-р мед. наук, проф., зав. отд. лабораторной диагностики ИППП и дерматозов dgderyabin@yandex.ru

Список литературы

World health organization/Leprosy. Available at: https://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs101/en/ (accessed 28 Mar 2018).

WHO SEARO/Department of Control of Neglected Tropical Diseases Operational Manual 2016 — Global Leprosy Strategy 2016-2020. Accelerating towards a leprosy-free world. Eds: Dr E. A. Cooreman/Leprosy. 2016; 62. ISBN: 978 92 9022 525 6.

Ющенко A.A., Урляпова Н.Г., Дуйко В.В. Анализ и прогноз эпидемиологической ситуации по лепре в России (по материалам 1951-2000 гг.): аналитический обзор. Астрахань: НИИ по изучению лепры; 2002.

Скрипкин Ю.К., Бутов Ю.С., Иванов О.Л. Дерматовенерология. Национальное руководство. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2013.

Lipworth S., Hammond R., Baron V., Hu Y., Coates A., Gillespie S. Defining Dormancy in mycobacterial disease. Tuberculosis. 2016

Дуйко В.В. Особенности организации противолепрозных мероприятий в России на современном этапе. Проблемы социальной гигиены и история медицины. 2013; 2: 31 — 2

Truman R.W., Andrews P.K., Robbins N.Y., Adams L.B., Krahenbuhl J.L., Gillis T.P. Enumeration of Mycobacterium leprae Using Real-Time PCR. PLoS Negl. Trop. Dis. 2008; 2(11): e328. https://doi.org/10.1371/journal.pntd.0000328

Cole S.T., Eiglmeier K., Parkhill J., James K.D., Thomson N.R. Massive gene decay in the leprosy bacillus. Nature. 2001; 22; 409 (6823): 1007-11.

Benjak A., Avanzi C., Singh P., Loiseau C., Girma S., Busso P. et al. Phylogenomics and antimicrobial resistance of the leprosy bacillus Mycobacterium leprae. Nature Communications. 2018; 9; Article number: 352.

Mycobacterium leprae & M. lepromatosis genesig kit. Available at: https://www.genesig.com/products/9333-mycobacterium-leprae-m-lepromatosis (accessed 28 Mar 2018).

Сароянц Л.В., Арнаудова К.Ш., Абрамов Д.Д., Трофимов Д.Ю. Разработка лабораторной диагностики лепры с помощью полимеразной цепной реакции. Клиническая лабораторная диагностика 2018; 63 (1): 55-9

Cole S.T., Supply P., Honore N. Repetitive sequences in Mycobacterium leprae and their impact on genome plasticity. Lepr. Rev. 2001; 72(4): 449-61.

Turankar R.P., Pandey S., Lavania M., Singh I. Nigam A., Darlong J., Darlong F., Sengupta U. Comparative evaluation of PCR amplification of RLEP, 16S rRNA, rpoT and Sod A gene targets for detection of Mycobacterium leprae DNA from clinical and environmental samples. Int. J. Mycobacteriol. 2015; 4(1): 54-9.

Braet S., Vandelannoote K., Meehan C.J., Brum Fontes A.N., Hasker E., Rosa P.S., Lucena-Silva N., Rigouts L., Suffys P.N., De Jong B.C. The repetitive element RLEP is a highly specific target for the detection of Mycobacterium leprae. J. Clin. Microbiol. 2018; 56(3). pii: e01924-17.

Выявлен новый случай заболевания лепрой в запущенной стадии. ФГБУ «Научно-исследовательский институт по изучению лепры» Минздрава России. Available at: https://www.inlep.ru/news/detail.php?ELEMENT_ID=51 (accessed 16 Mar 2018)

Кубанов А.А., Карамова А.Э., Семенова В.Г., Смольянникова В.А., Нефедова М.А. Рецидив лепры, развившийся после прекращения противолепрозной терапии. Вестник дерматологии и венерологии. 2016; 6: 66-72.

Семенова В.Г., Карамова А.Э., Нефедова М.А. Лепра под «маской» туберкулеза кожи — трудности диагностики. Вестник дерматологии и венерологии. 2017; 6: 91-9. 66-72.

Kamble R.R., Shinde V.S., Madhale S.P., Kamble A.A., Ravikumar B.P., Jadhav R.S. Extraction and detection of Mycobacterium leprae DNA from ZNCF-stained skin smear slides for better identification of negative skin smears. Indian J. Med. Microbiol. 2010; 28(1): 57-9.

De Wit T.F.R., Bekelie S., Osland A., Wieles B., Janson A., Thole J. The Mycobacterium leprae antigen 85 complex gene family: identification of the genes for the 85A, 85C, and related MPT51 proteins. Infection and Immunity. 1993; 61: 3642-7.

Cruz A.F., Furini R.B., Roselino A.M. Comparison between microsatellites and Ml MntH gene as targets to identify Mycobacterium leprae by PCR in leprosy. An. Bras. Dermatol. 2011; 86(4) :651-6.

Lavania M., Jadhav R., Turankar R.P., Singh I., Nigam A., Sengupta U. Genotyping of Mycobacterium leprae strains from a region of high endemic leprosy prevalence in India. Infect. Genet. Evol. 2015; 36: 256-61.

Hartskeerl R.A., de Wit M.Y., Klatser P.R. Polymerase chain reaction for the detection of Mycobacterium leprae. J. Gen. Microbiol. 1989; 135: 2357-64.

Woods S.A., Cole S.T. A rapid method for the detection of potentially viable Mycobacterium leprae in human biopsies: a novel application of PCR. FEMS Microbiol. Lett. 1989; 53: 305-9.

Martinez A.N., Talhari C., Moraes M.O., Talhari S. PCR-based techniques for leprosy diagnosis: from the laboratory to the clinic. PLoS Negl. Trop. Dis. 2014; 8(4): e2655.

Martinez A.N., Lahiri R., Pittman T.L., Scollard D., Truman R. et al. Molecular determination of Mycobacterium leprae viability by use of real-time PCR. J. Clin. Microbiol. 2009; 47: 2124-30.

Donoghue H.D., Holton J., Spigelman M. PCR primer that can detect low levels of Mycobacterium leprae DNA. J. Med. Microbiol. 2001; 50(2): 177-82.

Azevedo M.C., Ramuno N.M., Fachin L.R., Tassa M., Rosa P.S., Belone A.F., Diório S.M., Soares C.T., Garlet G.P., Trombone A.P. qPCR detection of Mycobacterium leprae in biopsies and slit skin smear of different leprosy clinical forms. Braz. J. Infect. Dis. 2017; 21(1):71-8.

Ключевые слова

#лепра #ПЦР в реальном времени